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  • 糖原合成酶(GCS)检测试剂盒
产品名称:

糖原合成酶(GCS)检测试剂盒

产品品牌: SOLARBIO/索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2024-07-29
储存条件
-20℃
中文名称
糖原合成酶(GCS)检测试剂盒
有效期
6个月
单位

推荐
若使用96孔板测定,需使用96孔UV板,推荐货号YA0602
英文名称
Glycogen synthase(GCS) Activity Assay Kit
别名
糖原合成酶试剂盒 GCS Kit 糖原合成酶(GCS)试剂盒 糖原合成酶(GCS)测试盒
检测方法
微量法 Spectrophotometer/

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝CAS详询
分子式详询纯度详询
分子量详询货号BC3335
规格100T/96S供货周期现货
主要用途测定原理: GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP,丙酮酸激酶和乳酸脱应用领域环保,化工,生物产业,农业,综合

糖原合成酶(GCS)活性检测试剂盒说明书

微量法

注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。

货号:BC3335

规格:100T/96S

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体110 mL×1

2-8℃保存

试剂一

液体25 mL×1

2-8℃保存

试剂二

液体7.5 mL×1

2-8℃保存

试剂三

液体20 μL×1

2-8℃保存

试剂四

粉剂×2

-20℃保存

试剂五

粉剂×2

-20℃保存

试剂六

液体45 μL×1

2-8℃保存

试剂七

粉剂×2

-20℃保存

试剂八

粉剂×2

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 试剂四:用前取1支加入1.5 mL试剂一充分溶解,-20℃分装保存4周,避免反复冻融;

2、 试剂五:用前取1支加入1.5 mL试剂一充分溶解,-20℃分装保存4周,避免反复冻融;

3、 工作液的配制:临用前将试剂三离心,取10 μL试剂三,加7 mL试剂一、1.5 mL试剂四、1.5.mL试剂五,充分混合(约66T),现用现配,也可根据样本量按比例配制;

4、 试剂八的配制:

(1) 临用前取1瓶试剂八加入2.5 mL试剂二溶解,再加入1支试剂七溶解,可-20℃分装保存4周,避免反复冻融;

(2) 用前试剂六先离心,取14 μL试剂六加入1.46mL上述(1)中溶液,充分混合(约36T),现用现配,也可根据样本量按比例配制

产品说明:

糖原合成酶(Glycogen synthase , GCS)将UDPG的糖基加到原有糖原或是糖原蛋白的非还原端,以α-1,4糖苷键连接。GCS是动物机体糖原合成过程的限速酶,同时也是胰岛素作用的主要靶酶,在糖代谢及维持血糖相对稳定的过程中有着重要作用。

GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UDP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH生成NAD+,在340 nm下测定NADH的下降速率,即可反映GCS活性。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、超声破碎仪、微量石英比色皿/96UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后,8000g4℃离心10min,取上清置于冰上待测。

细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率200w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

血清等液体:直接检测。(若溶液浑浊则离心后取上清进行测定)

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,紫外分光光度计蒸馏水调零。

2、 临用前将工作液与试剂八置于37℃水浴锅中预热5min(工作液用多少预热多少)。

3、 操作表:在微量石英比色皿/96UV板中分别加入下列试剂:

试剂名称(µL

空白管

测定管

样本

-

10

蒸馏水

10

-

试剂八

40

40

工作液

150

150

加入样本即开始计时,充分混匀后于340nm处测定10s时的吸光值A11min 10s时的吸光值A2,计算ΔA测定管= A1测定-A2测定,ΔA空白管=A1空白-A2空白,ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。

三、GCS酶活计算

A、按微量石英比色皿计算:

1. 按蛋白浓度计算

酶活定义:每毫克蛋白每分钟消耗1nmolNADH定义为一个酶活力单位。

GCS酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×V反总×109÷V×Cpr÷T=3215.4×ΔA÷Cpr

2. 按样本质量计算

酶活定义:每克样本每分钟消耗1nmolNADH定义为一个酶活力单位。

GCS酶活(U/g 质量)=ΔA÷ε×d×V反总×109÷V×W÷V样总)÷T =3215.4×ΔA÷W

3. 按照细菌或细胞数量计算

酶活定义:每104个细胞每分钟消耗1nmolNADH定义为一个酶活力单位。

GCS酶活(U/104 cell=ΔA÷ε×d×V反总×109÷V÷V样总×细胞数量(万个))÷T

=3215.4×ΔA÷细胞数量(万个)

 

4. 按液体体积计算

酶活定义:每毫升液体每分钟消耗1nmolNADH定义为一个酶活力单位。

GCS酶活(U/mL=ΔA÷ε×d×V反总×109÷V÷T =3215.4×ΔA

εNADH摩尔消光系数,6.22×103 L/mol/cmd:比色皿光径,1cm109:单位换算系数,1mol=109nmolV

反总:反应体系总体积,2×10-4LV样:反应体系中样本体积,0.01mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW:样本质量,gV样总:加入提取液体积,1mLT:反应时间:1min

B、按96UV板计算:

将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm96UV板光径)进行计算即可。

实验实例:

1、 0.1g小鼠心脏加入1mL提取液进行样本处理,取上清后按照测定步骤操作,用微量石英比色皿测得计算ΔA测定管=A1测定-A2测定=1.2455-1.1883=0.0572ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9639-0.9529=0.011ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.0572-0.011=0.0462,按照样本质量计算酶活得:

GCS酶活(U/g 质量)=3215.4×ΔA÷W=1485.5 U/g 质量。

注意事项:

1、 样本提取上清液置于冰上待测,提取样本建议当天测完。

2、 ΔA大于0.2,建议将样本用提取液稀释适当倍数后测定,以提高检测灵敏度,并在计算公式中乘以相应的稀释倍数。

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