焦磷酸化酶（UGP）检测试剂盒 糖原

UDPG焦磷酸化酶（UGP）活性检测试剂盒说明书

紫外分光光度法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC3360

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前加30mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃可保存4周，禁止反复冻融。

2. 试剂二：临用前取1瓶加2.5 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂2-8℃保存2周。

3. 试剂三：临用前取1支加0.7 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃可保存4周，禁止反复冻融。

4. 试剂四：临用前取1支加1 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃可保存2周，禁止反复冻融。

5. 工作液的配制：将试剂一：试剂二：试剂三：试剂四：试剂五：试剂六按体积比=600：100：20：40：100：250混合，现用现配。

产品说明：

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP，EC 2.7.7.9）在自然界广泛分布。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG），UDPG是高等植物和动物中主要活化酶的形式，作为葡萄糖基供体参与糖原、蔗糖、纤维素等的合成代谢。

UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖，其在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，UGP活性可以用340nm的吸光值的变化来反应。  

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

血清等液体：直接检测。

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、 操作表：

三、UGP酶活计算

1. 按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

UGP（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V反总×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

2. 按照样本质量计算

酶活单位定义：每克组织每分钟产生1nmol 的NADPH定义为一个酶活力单位。

UGP（U/g 质量）=[ΔA÷（ε×d）×V反总×10⁹]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W

3. 按照细胞数量计算

酶活单位定义：每10⁴个细胞每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

UGP（U/10⁴ cell）=[ΔA÷（ε×d）×V反总×10⁹]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.643×ΔA

4. 按照液体体积计算

酶活单位定义：每毫升液体每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

UGP（U/mL）=[ΔA÷（ε×d）×V反总×10⁹]÷V样÷T=321.54×ΔA

V反总：反应体系总体积，1×10^-3L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g ；500：细胞或细菌总数，500万；10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol。

注意事项：

1. 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。

2. ΔA大于0.6或者A2测定大于1.2时，建议将样本稀释后再进行测定。当ΔA小于0.01时，可以延长反应时间（5min或10min）来测定。

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