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  • 焦磷酸化酶(UGP)检测试剂盒 糖原
产品名称:

焦磷酸化酶(UGP)检测试剂盒 糖原

产品品牌: SOLARBIO/索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2024-07-29
储存条件
-20℃
中文名称
焦磷酸化酶(UGP)检测试剂盒 糖原
有效期
6个月
单位

英文名称
UDP-glucose pyrophosphosphprylase(UGP) Activity Assay Kit
检测方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
规格
50T/48S

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝CAS详询
分子式详询纯度详询
分子量详询货号BC3360
规格50T/48S供货周期现货
主要用途焦磷酸化酶(UGP)检测应用领域环保,化工,生物产业,农业,综合

UDPG焦磷酸化酶(UGP)活性检测试剂盒说明书

紫外分光光度法

注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。

货号BC3360

规格50T/48S

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体55 mL×1

2-8℃保存

试剂一

粉剂×1

-20℃保存

试剂二

粉剂×2

2-8℃保存

试剂三

粉剂×2

-20℃保存

试剂四

粉剂×2

-20℃保存

试剂五

液体5 mL×1

2-8℃保存

试剂六

液体15 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1. 试剂一:临用前加30mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存4,禁止反复冻融。

2. 试剂二:临用前12.5 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂2-8℃保存2

3. 试剂三:临用前10.7 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存4,禁止反复冻融。

4. 试剂四:临用前11 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存2,禁止反复冻融。

5. 工作液的配制:将试剂一:试剂二:试剂三:试剂四:试剂五:试剂六按体积比=6001002040100250混合,现用现配。

产品说明:

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylaseUGPEC 2.7.7.9)在自然界广泛分布。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖(UDPG),UDPG是高等植物和动物中主要活化酶的形式,作为葡萄糖基供体参与糖原、蔗糖、纤维素等的合成代谢。

UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖,其在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPHUGP活性可以用340nm的吸光值的变化来反应。  

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

血清等液体:直接检测。

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、 操作表:

试剂名称

空白管

测定管

样本(µL


100

工作液(µL

900

900

蒸馏水(µL

100

-

1mL石英比色皿中分别加入上述试剂,充分混匀后于340nm处测定10s时的吸光值A1,迅速置于37水浴锅或者培养箱反应5min,拿出迅速擦干测定310s时的吸光值A2,计算ΔA测定管= A2测定-A1测定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。

三、UGP酶活计算

1. 按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。

UGPU/mg prot=[ΔA÷ε×d×V反总×109]÷(V×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

2. 按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

UGPU/g 质量)=[ΔA÷ε×d×V反总×109]÷(W ×V÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W

3. 按照细胞数量计算

酶活单位定义:每104个细胞每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。

UGPU/104 cell=[ΔA÷ε×d×V反总×109]÷(500×V÷V样总) ÷T=0.643×ΔA

4. 按照液体体积计算

酶活单位定义:每毫升液体每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。

UGPU/mL=[ΔA÷ε×d×V反总×109]÷V÷T=321.54×ΔA

V反总:反应体系总体积,1×10-3LεNADPH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.1mLV样总:加入提取液体积,1mLT:反应时间,5minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g 500:细胞或细菌总数,500万;109:单位换算系数,1mol=109nmol

注意事项:

1. 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔,正常情况下,变化不超过0.01

2. ΔA大于0.6或者A2测定大于1.2,建议将样本稀释后再进行测定。当ΔA小于0.01时,可以延长反应时间(5min10min)来测定。

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