品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | CAS | 详询 |
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分子式 | 详询 | 纯度 | 详询 |
分子量 | 详询 | 货号 | BC3360 |
规格 | 50T/48S | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 焦磷酸化酶(UGP)检测 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农业,综合 |
紫外分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC3360
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体55 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 粉剂×1瓶 | -20℃保存 |
试剂二 | 粉剂×2瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 粉剂×2支 | -20℃保存 |
试剂四 | -20℃保存 | |
试剂五 | 液体5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂六 | 液体15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1. 试剂一:临用前加30mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃可保存4周,禁止反复冻融。
2. 试剂二:临用前取1瓶加2.5 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂2-8℃保存2周。
3. 试剂三:临用前取1支加0.7 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃可保存4周,禁止反复冻融。
4. 试剂四:临用前取1支加1 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃可保存2周,禁止反复冻融。
5. 工作液的配制:将试剂一:试剂二:试剂三:试剂四:试剂五:试剂六按体积比=600:100:20:40:100:250混合,现用现配。
产品说明:
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase,UGP,EC 2.7.7.9)在自然界广泛分布。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖(UDPG),UDPG是高等植物和动物中主要活化酶的形式,作为葡萄糖基供体参与糖原、蔗糖、纤维素等的合成代谢。
UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖,其在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH,UGP活性可以用340nm的吸光值的变化来反应。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
血清等液体:直接检测。
二、测定步骤
1、 紫外分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、 操作表:
试剂名称 | 空白管 | 测定管 |
样本(µL) | 100 | |
工作液(µL) | 900 | 900 |
蒸馏水(µL) | 100 | - |
在1mL石英比色皿中分别加入上述试剂,充分混匀后于340nm处测定10s时的吸光值A1,迅速置于37℃水浴锅或者培养箱反应5min,拿出迅速擦干测定310s时的吸光值A2,计算ΔA测定管= A2测定-A1测定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。 |
三、UGP酶活计算
1. 按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
UGP(U/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活单位定义:每克组织每分钟产生1nmol 的NADPH定义为一个酶活力单位。
UGP(U/g 质量)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
3. 按照细胞数量计算
酶活单位定义:每104个细胞每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
UGP(U/104 cell)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.643×ΔA
4. 按照液体体积计算
酶活单位定义:每毫升液体每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
UGP(U/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×109]÷V样÷T=321.54×ΔA
V反总:反应体系总体积,1×10-3L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g ;500:细胞或细菌总数,500万;109:单位换算系数,1mol=109nmol。
注意事项:
1. 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔,正常情况下,变化不超过0.01。
2. ΔA大于0.6或者A2测定大于1.2时,建议将样本稀释后再进行测定。当ΔA小于0.01时,可以延长反应时间(5min或10min)来测定。
焦磷酸化酶(UGP)检测试剂盒 糖原 焦磷酸化酶(UGP)检测试剂盒 糖原