品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | CAS | 详询 |
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分子式 | 详询 | 纯度 | 详询 |
分子量 | 详询 | 货号 | BC3355-100T/48S |
规格 | 100T/48S | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 糖原磷酸化酶b(GPb)活性检测 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农业,综合 |
糖原磷酸化酶b(GPb)活性检测试剂盒说明书
微量法
货号:BC3355
规格:100T/48S
产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体60mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 粉剂×1支 | -20℃保存 |
试剂五 | 粉剂×2支 | -20℃保存 |
试剂六 | 粉剂×2支 | -20℃保存 |
试剂七 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
试剂二:临用前加入0.5 mL蒸馏水,充分混匀;
试剂三:临用前加入0.5mL蒸馏水,充分混匀;可分装后-20℃保存4周,避免反复冻融;
试剂四:临用前加入1.25 mL蒸馏水,充分混匀;可分装后-20℃保存4周,避免反复冻融;
试剂五:临用前每支加入1 mL蒸馏水,充分混匀;可分装后-20℃保存4周,避免反复冻融;一支即可做100T,为延长试剂盒使用时间故多给一支。
试剂六:临用前每支加入1 mL蒸馏水,充分混匀;可分装后-20℃保存4周,避免反复冻融;一支即可做100T,为延长试剂盒使用时间故多给一支。
试剂七:临用前加入2 mL蒸馏水,充分混匀;可分装后-20℃保存4周,避免反复冻融;
工作液的配制:临用前根据实验所需用量,按照试剂一:试剂二:试剂三:试剂四 =148μL: 4μL: 4μL: 4μL(1T的量)的比例,充分混匀,现用现配。
产品说明:
糖原磷酸化酶是糖原分解代谢中的关键酶,催化糖原的磷酸化反应。该酶分为有活性的糖原磷酸化酶a(Glycogen phosphorylase a, GPa)和无活性的糖原磷酸化酶b(Glycogen phosphorylase b, GPb)两种形式。糖原的分解主要在糖原磷酸化酶a的催化下进行。未添加激活剂时,糖原磷酸化酶a催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH,在340nm下测定NADPH上升速率,即可反映糖原磷酸化酶a活性。添加激活剂测定GP(GPa和GPb)总活性,未添加激活剂时测定GPa活性,GP活性-GPa活性得到GPb活性。在340nm下测定NADPH上升速率,即可反映糖原磷酸化酶a活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、研钵/匀浆器、电子天平、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、冰和蒸馏水。
操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项:
如果测定吸光值ΔA>0.6,建议稀释样本后再测定,计算公式中乘以稀释倍数;如果测定吸光值较低或接近空白OD值,建议增加样本量后再进行测定。
实验实例:
称取0.1 g兔子肝脏组织,加入1 mL提取液,冰浴匀浆,8000 g,4℃条件下离心10 min;取上清置于冰上待测。用石英比色皿按照测定步骤操作,计算ΔAGPa=A2-A1=0.3472-0.2253=0.1219,ΔAGP=A4-A3=0.4059-0.2274=0.1785,按公式计算活性:GPb(U/g 质量)=321.54×(ΔAGP-ΔAGPa)÷W =321.54×(0.1785-0.1219)÷0.1 =181.99U/g 质量
糖原磷酸化酶b(GPb)检测试剂盒 糖原磷酸化酶b(GPb)检测试剂盒