乙酸激酶(ACK)活性检测试剂盒 其它

提取液：临用前将试剂九加入到提取液中，并于2-8℃保存；

试剂二：临用前每瓶加入4 mL蒸馏水，充分溶解待用。用不完的试剂仍2-8℃保存；

试剂三：临用前每瓶加入3 mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂-20℃保存；

试剂四：临用前每瓶加入2 mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂-20℃保存；

试剂五：临用前每支加入1 mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂-20℃保存；

试剂六：液体置于试剂瓶内EP管中。临用前根据样本量将试剂六、蒸馏水按43:457（V:V）的比例配制备用，现用现配；

试剂七：液体置于试剂瓶内EP管中。临用前根据样本量将试剂七、蒸馏水按1:9（V:V）的比例配制备用，现用现配；

试剂八：临用前加入5 mL蒸馏水，充分溶解待用。用不完的试剂仍2-8℃保存；

工作液：吸取0.3 mL 试剂二、1 mL试剂三、0.65 mL试剂四、0.2 mL试剂五、0.2 mL试剂六、0.2 mL试剂七、1 mL试剂八混匀，也可根据比例现用现配，于冰上备用。

测定过程中样本和所有试剂在冰上放置，以免变性和失活。

比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

ΔA大于1时，建议稀释后测量，注意计算公式乘以稀释倍数；ΔA小于0.01时，建议延长反应时间测量，注意计算公式变化。

取0.1g肾脏组织样本，加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定1-A测定2=1.893-1.147=0.746，ΔA空白=A空白1-A空白2=1.453-1.448=0.005，ΔA=ΔA测定-ΔA空白= 0.746-0.005=0.741，按样本质量计算酶活得：

取500万大肠杆菌加入1mL提取液超声破碎，离心，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定1-A测定2=1.476-1.448=0.028，ΔA空白=A空白1-A空白2=1.453-1.448=0.005，ΔA=ΔA测定-ΔA空白=0.028-0.005=0.023，按细菌数量计算酶活得：

Mukhopadhyay S, Hasson M S, Sanders D A. A continuous assay of acetate kinase activity: Measurement of inorganic phosphate release generated by hydroxylaminolysis of acetyl phosphate[J]. Bioorganic chemistry, 2008, 36(2): 65-69.