土壤亚硝酸还原酶检测试剂盒

土壤亚硝酸还原酶（S-NiR）活性检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC2995

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前加入1mL蒸馏水充分溶解，2-8℃保存2周。临用前根据用量用蒸馏水稀释100倍，现用现配；

2、 试剂二：临用前加15mL蒸馏水备用，2-8℃保存2周；

3、 试剂三：临用前加15mL蒸馏水溶解，此溶液为饱和溶液，取上清使用即可。用不完的试剂2-8℃保存2周；

4、 标准品：10μmol/mL 亚*标准液。

产品说明：

土壤亚硝酸还原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）是反硝化作用中的关键酶之一，它是由土壤反硝化细菌产生的一种还原酶类，可将NO₂^-还原为NO，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。

亚硝酸还原酶可将NO₂^-还原为NO，使样本中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO₂^-减少，即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50目筛、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或37℃烘箱烘干，过30-50目筛。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、 标准液的稀释：将标准液用蒸馏水稀释至0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL的标准液。

备注：实验中每个标准管需100µL标准溶液。

3、 样本测定：

三、S-NiR计算

1. 标准曲线的绘制：

根据标准管的浓度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，μmol/mL）。

2. S-NiR的计算：

酶活单位定义：每g土样每天还原1μmol NO₂^ˉ的量为一个酶活力单位。

S-NiR（U/g 土样）=x×V反应÷W÷T=2.4×x÷W

T：反应时间，3h=1/8d；V反应：反应体系体积，0.3mL；W：土样质量，g。

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