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  • 大鼠C反应蛋白ELISA试剂盒
产品名称:

大鼠C反应蛋白ELISA试剂盒

产品品牌: 索莱宝 价格: 2600
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2022-08-16
Solarbio ELISA 试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。大鼠C反应蛋白ELISA试剂盒是将抗大鼠CRP单克隆抗体包被在酶标板上;分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本;洗板后加入生物素化抗 大鼠CRP抗体;后,在λmax=450 nm(OD=450 nm)处测定反应孔样品吸光度(OD),通过计算出样本中大鼠CRP的浓度。​

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号SEKR-0017
规格96T/48T供货周期现货
主要用途大鼠CRP含量测定应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

大鼠C反应蛋白ELISA试剂盒

背景介绍:

C 反应蛋白(C-reactive protein ,CRP)是指在机体受到感染或组织损伤时血浆中一些急剧上升的蛋白质(急性蛋白)。CRP 是一种环状五聚体蛋白,其一级结构包含 5 个相同的亚单位,亚单位间以非共价键相结合,每个亚单位在其表面都含有 CRP 配体结合位点(与配体的结合需Ca 参与),其另一面含有 Clq 及 FcTR 结合位点。CRP 可以激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用,从而清除入侵机体的病原微生物和损伤,坏死,凋亡的组织细胞,在机体的天然免疫过程中发挥重要的保护作用。

 

检测原理:

 Solarbio (Solarbio ®)ELISA 试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗大鼠 CRP 单克隆抗体包被在酶标板上;分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本,标准品和样本中的大鼠 CRP 会与酶标板上的包被抗体充分结合;洗板后加入生物素化抗大鼠CRP 抗体,该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的大鼠 CRP 发生特异性结合;洗板后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素,生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合;洗板后加入显色剂底物 TMB,若反应孔中样品存在不同浓度的大鼠 CRP,则 HRP 会使无色 TMB 变成不同深浅(正相关)的蓝色物质,加入终止液后反应孔会变成黄色;后,在 λmax=450 nm(OD=450 nm)处测定反应孔样品吸光度(OD),样本中的
大鼠 CRP 浓度与 OD 成正比,通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中大鼠CRP 的浓度。

 

原理图:

 

注意事项:※※※

1. 试剂盒应在有效期内使用,请不要使用过期的试剂。

2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱,已复溶但未用完的标准品,请丢弃。

3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30 min,且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。

4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测,且加入试剂的顺序应保持*。

5. 为避免交叉污染,请在试验中使用 1 次性试管,枪头,封板膜(※)及洁净塑料容 器。.

6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少,在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶 盖上,使用前请离心处理(5-10 S 即可),使管壁上的液体集中在管底部,取用时,请 用移液器小心吹打几次。

7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外,请不要使用其他来源试剂盒内含的 试剂代替本试剂盒中的某单个组分。

8. 为保证结果准确,每次检测均需做标准曲线。

安全提示:试剂盒中的终止液为酸性溶液,操作人员在使用时请带上手套并注意防护;在操 作过程中也要避免试剂接触皮肤和眼睛,如果不慎接触,请用大量清水清洗;检测血液样本 及其它体液样本时,请按国家生物实验室安全防护有关管理规定执行。

 

试剂盒组成及储存:

 

自备实验器材(不提供,可代购)

1. 酶标仪(主波长 450nm,参考波长 630nm)

2. 高精度移液器及一次性吸头:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

3. 洗板机或洗瓶

4. 37℃孵育箱

5. 双蒸水,去离子水,量筒等

6. 稀释用聚丙烯试管

 

大鼠C反应蛋白ELISA试剂盒样本收集及储存:

1. 细胞培养上清: 将细胞培养基移无菌离心管,在 4℃条件下 1000 ×g 离心 10 min,然后将上清等量分 装于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),避免反复冻融。

2. 血清样本: 室温血液自然凝固 20 min 后,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装 于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),保存过程中如有沉淀, 请再次离心,避免反复冻融。

3. 血浆样本: 将全血收集到含抗血凝剂的管中,根据标本的实际要求选择 EDTA,柠檬酸钠或肝素作 为抗凝剂,混合 20 min,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),避免反复冻融。

 

※注意:血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本,以免影响检测结果;如果样本中的靶标 物检测浓度高于标准品的顶值,请将样品做适当倍数稀释后检测,建议正式实验前做预实 验以确定稀释倍数。 

 

试剂准备:

1. 试剂回温:首先在实验前 30 min 将试剂盒,待测样本放置于室温下,浓缩洗涤液如出现 结晶,请放入 37℃温浴直到结晶全部溶解。

2. 配制洗涤液:预先计算好稀释后的洗涤液使用体积,然后用双蒸水或去离子水将 20 倍 浓缩洗涤液稀释成 1 倍应用液,未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。

3. 标准品梯度稀释:加入标准品/样本稀释液(SR1)0.5ml冻干标准品中,静置15分钟待 其*溶解后轻轻混匀(浓度为20000pg/ml),然后按照以下浓度:20000、 10000、 5000、2500、1250、625、312.5、 0 pg/ml进行稀释。复溶过的标准品原液 (20000pg/ml)未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装,并将其贮存在-20~-80℃ 冰箱,具体如下图。

 

4. 生物素化抗体工作液:预先计算好试验所需用量,用检测稀释液(SR2)将100倍抗体浓 缩液稀释成1倍应用工作液(稀释前充分混匀),请在30分钟内加入到反应孔中。

 

生物素化抗体工作液具体稀释方法如下: 

 

 

5. 酶结合物工作液:按每次试验所需用量配制,用酶结合物稀释液(SR3)将100倍浓缩酶 结合物稀释成1倍应用工作液(稀释前离心),请在30分钟内使用。 酶结合物工作液具体稀释方法如下: 

 

酶结合物工作液具体稀释方法如下:

 

 

6. 洗涤方法:

自动洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,注入洗涤液为 300ul/孔,注 与吸出间隔为 30 秒,洗板 5 次。

手工洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,用洗瓶加入洗涤液 300ul/孔, 静止 30 秒后甩净酶标板孔中液体,在厚迭的吸水纸上拍干,洗板 5 次。 

 

检测步骤: 

 

 

结果判断:

1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测,参考波长为 630 nm。如不能进行 双波长检测,请用 450 nm 的 OD 测定值减去 630 nm 的 OD 测定值。

2.计算标准品、样品的平均 OD 值:每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值

3.以标准品浓度为横坐标,吸光度OD值为纵坐标,用软件绘制标准曲线,样品中CRP含量 可通过对应OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

4.若标本 OD 值高于标准曲线上限,应做适当稀释后重新检测,计算浓度时再乘以稀释倍数。

 

参数表征:

 

1. 数据及标准曲线 

2. 灵敏度:

低可检测大鼠 CRP 浓度达 150pg/ml, 20 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两个标准差,计算相应的可检测浓度。

3. 特异性: 

不与大鼠 SAP,PTX2 反应,人和小鼠 CRP 等反应

4. 重复性:

板内,板间变异系数<10%

5. 回收率:

在选取的健康大鼠血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的大鼠 CRP,计算回收率。

6. 线性稀释: 分别在选取的 4 份健康大鼠血浆和细胞培养上清中加入高浓度大鼠 CRP,在标准曲线动力 学范围内进行稀释,评估线性。 

 

大鼠C反应蛋白ELISA试剂盒常见问题及解决方法: 

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