品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | 货号 | SEKR-0030 |
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规格 | 96T/48T | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 大鼠sICAM-1含量测定 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 |
大鼠可溶性细胞间粘附分子1ELISA试剂盒
注意事项:
1. 试剂盒应在有效期内使用,请不要使用过期的试剂。
2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱,已复溶但未用完的标准品,请丢弃。
3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30 min,且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。
4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测,且加入试剂的顺序应保持*。
5. 为避免交叉污染,请在试验中使用 1 次性试管,枪头,封板膜(※)及洁净塑料容器。.
6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少,在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶 盖上,使用前请离心处理(5-10 S 即可),使管壁上的液体集中在管底部,取用时,请用移液器小心吹 打几次。
7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外,请不要使用其他来源试剂盒内含的 试剂代替本试剂盒中的某单个组分。
8. 为保证结果准确,每次检测均需做标准曲线。
安全提示:
试剂盒中的终止液为酸性溶液,操作人员在使用时请带上手套并注意防护;在操作过程中也要避免试 剂接触皮肤和眼睛,如果不慎接触,请用大量清水清洗;检测血液样本及其它体液样本时,请按国家生物 实验室安全防护有关管理规定执行。
自备实验器材(不提供,可代购)
1. 酶标仪(主波长 450nm,参考波长 630nm)
2. 高精度移液器及一次性吸头:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3. 洗板机或洗瓶
4. 37℃孵育箱
5. 双蒸水,去离子水,量筒等
6. 稀释用聚丙烯试管
大鼠可溶性细胞间粘附分子1ELISA试剂盒
样本收集及储存:
1. 细胞培养上清: 将细胞培养基移无菌离心管,在 4℃条件下 1000 ×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并 于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),避免反复冻融。
2. 血清样本: 室温血液自然凝固 20 min 后,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于 -20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),保存过程中如有沉淀,请再次离心,避免反复冻融。
3. 血浆样本: 将全血收集到含抗血凝剂的管中,根据标本的实际要求选择 EDTA,柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混 合 20 min,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),避免反复冻融。
※注意:
血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本,以免影响检测结果;如果样本中的靶标物检测浓度高 于标准品的值,请将样品做适当倍数稀释后检测,建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。
试剂准备:
1. 试剂回温:首先在实验前 30 min 将试剂盒,待测样本放置于室温下,浓缩洗涤液如出现结晶,请放入 37℃温浴直到结晶全部溶解。
2. 配制洗涤液:预先计算好稀释后的洗涤液使用体积,然后用双蒸水或去离子水将 20 倍浓缩洗涤液稀释 成 1 倍应用液,未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。
3. 标准品梯度稀释:加入标准品/样本稀释液(SR1)0.5ml冻干标准品中,静置15分钟待其*溶解后 轻轻混匀(浓度为4000pg/ml),然后按照以下浓度:4000、2000、 1000、500、250、125、62.5、 0 pg/ml 进行稀释。复溶过的标准品原液(4000pg/ml)未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装,并将其 贮存在-20~-80℃冰箱,具体如下图。
4. 生物素化抗体工作液:预先计算好试验所需用量,用检测稀释液(SR2)将100倍抗体浓缩液稀释成1倍 应用工作液(稀释前充分混匀),请在30分钟内加入到反应孔中。
5. 酶结合物工作液:按每次试验所需用量配制,用酶结合物稀释液(SR3)将100倍浓缩酶结合物稀释成1 倍应用工作液(稀释前离心),请在30分钟内使用。
6. 洗涤方法:
自动洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,注入洗涤液为 300ul/孔,注 与吸出间隔为 30 秒,洗板 5 次。
手工洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,用洗瓶加入洗涤液 300ul/孔,静止 30 秒后甩净酶标板孔中液体,在厚迭的吸水纸上拍干,洗板 5 次。
大鼠可溶性细胞间粘附分子1ELISA KIT
结果判断:
1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测,参考波长为 630 nm。如不能进行双波长检测,请 用 450 nm 的 OD 测定值减去 630 nm 的 OD 测定值。
2.计算标准品、样品的平均 OD 值:每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值
3.以标准品浓度为横坐标,吸光度OD值为纵坐标,用软件绘制标准曲线,样品中sICAM-1含量可通过对应 OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
4.若标本 OD 值高于标准曲线上限,应做适当稀释后重新检测,计算浓度时再乘以稀释倍数。
2. 灵敏度:
低可检测大鼠 sICAM-1 浓度达 30pg/ml, 20 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两个标准差,计算相应的可检测浓度。
3. 特异性: 不与大鼠 E-Selectin ,小鼠的 ICAM-1 、ICAM-2、 E-Selectin 、L-Selectin 、P-Selectin 、VCAM-1, 人 的 ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3 等反应
4. 重复性:
板内,板间变异系数<10%
5. 回收率:
在选取的健康大鼠血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的大鼠 sICAM-1,计算回收率。
6. 线性稀释: 分别在选取的 4 份健康大鼠血浆和细胞培养上清中加入高浓度大鼠 sICAM-1,在标准曲线动力学范围内进 行稀释,评估线性。
Rat sICAM-1 ELISA KIT