苯*氨酸解氨酶(PAL)活性检测试剂盒 微量法

苯*氨酸解氨酶（PAL）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0215
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前取1瓶加入2.5 mL蒸馏水充分溶解待用；现配现用，2-8℃可保存2周。

产品说明：
PAL（EC4. 3 1 5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶和限速酶，在动物体内尚未发现。与一些重要的次生物质如木质素、类黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育、抗病、抗逆反应中起重要作用。
PAL催化L-苯*氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。

2. 操作表：（在EP管或96孔板中按顺序加入下列试剂）

混匀，静置10min后，290nm处记录测定管吸光值A1和空白管吸光值A2，ΔA=A1-A2。（空白管只需做1-2次）
三、PAL活性计算
a、用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.1定义为一个酶活性单位。
PAL活性（U/mg prot）=ΔA×V反总÷0.1÷（Cpr×V样）÷T =13.33×ΔA÷Cpr
（2）按按样本质量计算
单位的定义：每g组织在每mL反应体系中分钟使290nm下吸光值变化0.1定义为一个酶活性单位。
PAL活性（U/g质量）=ΔA×V反总÷0.1÷（V样÷V提取×W）÷T =13.33×ΔA÷W
V样：加入样本体积，5µL=0.005mL；V提取：加入提取液体积，1mL；V反总：反应总体积，200µL=0.2mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
b、用96孔板测定的计算公式如下
（1）按蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.05定义为一个酶活性单位。
PAL活性（U/mg prot）=ΔA×V反总÷0.05÷（Cpr×V样）÷T =26.67×ΔA÷Cpr
（2）按按样本质量计算
单位的定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.05定义为一个酶活性单位。
PAL活性（U/g质量）=ΔA×V反总÷0.05÷（V样÷V提取×W）÷T =26.67×ΔA÷W
V样：加入样本体积，5µL=0.005mL；V提取：加入提取液体积，1mL；V反总：反应总体积，200µL=0.2mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
相关发表文献：

1. Li B, Ding Y, Tang X, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)[J]. Food and Bioprocess Technology, 2019, 12(4): 563-574.

2. Zhang J, Lv J, Xie J, et al. Nitrogen Source Affects the Composition of Metabolites in Pepper (Capsicum annuum L.) and Regulates the Synthesis of Capsaicinoids through the GOGAT–GS Pathway[J]. Foods, 2020, 9(2): 150.

参考文献：

1. Aydaş S B, Ozturk S, Aslım B. Phenylalanine ammonia lyase (PAL) enzyme activity and antioxidant properties of some cyanobacteria isolates[J]. Food chemistry, 2013, 136(1): 164-169.

2. Rosler J, Krekel F, Amrhein N, et al. Maize phenylalanine ammonia-lyase has tyrosine ammonia-lyase activity[J]. Plant physiology, 1997, 113(1): 175-179.

3. Cheng G W, Breen P J. Activity of phenylalanine ammonia-lyase (PAL) and concentrations of anthocyanins and phenolics in developing strawberry fruit[J]. Journal of the American Society for Horticultural Science, 1991, 116(5): 865-869.

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