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  • 多酚氧化酶(PPO)活性生化检测试剂盒
产品名称:

多酚氧化酶(PPO)活性生化检测试剂盒

产品品牌: 索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-04
多酚氧化酶(PPO)活性生化检测试剂盒
检测方法微量法
测定意义:PPO(EC1.10.3.1)主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关
测定原理:PPO能够催化邻苯二酚产生醌,后者在410nm有特征光吸收。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0195
规格100管/48样供货周期现货
主要用途检测样本中的多酚氧化酶活性含量应用领域医疗卫生,环保,化工,农业

多酚氧化酶(PPO)活性检测试剂盒说明书微量法

注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

货号:BC0195

规格:100T/48S

 

产品内容:提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存,用前混匀即可;试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存;试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。

 

多酚氧化酶(PPO)活性生化检测试剂盒产品说明:PPO(EC1.10.3.1)是一种广泛存在于植物体内的含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。PPO能够催化邻苯二酚产生邻苯二醌,后者在410nm有特征光吸收。

 

需自备的仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、粗酶液提取:

  1. 收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次);8000g4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
  2. 称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。

 

二、测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长410nm,蒸馏水调零。

2.样本测定(在EP管中依次加入下列试剂)

 

充分混匀,5000g,常温离心10min,收集上清,取200μL微量玻璃比色皿或96孔板中,410nm处检测测定管和对照管吸光度,计算ΔA=A测定-A对照。

 

注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5min沸水浴处理。

 

多酚氧化酶(PPO)活性生化检测试剂盒PPO活性计算:

a. 用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下

(1)按样本蛋白浓度计算:单位的定义:每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。PPO(U/mgprot)=ΔA÷0.01×V反总÷(Cpr×V样)÷T=60×ΔA÷Cpr

  1. 按样本鲜重计算:单位的定义:每分钟每g组织在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。PPO(U/g鲜重)=ΔA÷0.01×V反总÷(W÷V样总×V样)÷T=60×ΔA÷W
  2. 按细菌或细胞数量计算:单位的定义:每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。PPO(U/104cell)=ΔA÷0.01×V反总÷(500÷V样总×V样)÷T=0.12×ΔAb.

 

b. 用96孔板测定的计算公式如下

(1)按样本蛋白浓度计算:单位的定义:每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.005定义为一个酶活力单位。PPO(U/mgprot)=ΔA÷0.005×V反总÷(Cpr×V样)÷T=120×ΔA÷Cpr

  1. 按样本鲜重计算:单位的定义:每分钟每g组织在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.005定义为一个酶活力单位。PPO(U/g鲜重)=ΔA÷0.005×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T=120×ΔA÷W
  2. 按细菌或细胞数量计算:单位的定义:每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.005定义为一个酶活力单位。PPO(U/104cell)=ΔA÷0.005×V反总÷(500÷V样总×V样)÷T=0.24×ΔAV反总:反应体系总体积,0.3mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞数量,500万;T:反应时间,10min。

 

注意事项:不同样本的多酚氧化酶适合的反应温度略有差别,可在25-37℃之间进行调节。

相关文献:

《Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)》 作者:Beibei Li,Yang Ding,Xiuli Tang,Guoyi Wang,Shujuan Wu,Xianxian Li,Xiaofei Huang,Tongtong Qu,Jifeng Chen 期刊:Food and Bioprocess Technology 影响因子:3.032 PMID:
《MTA1 promotes the invasion and migration of pancreatic cancer cells potentially through the HIF-α/VEGF pathway》 作者:B Li, Y Ding, X Tang, G Wang, S Wu, X Li 期刊:Journal of Receptor and Signal Transduction Research. 影响因子:2.998 PMID:30396299
 

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