多酚氧化酶（PPO）活性生化检测试剂盒

多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒说明书微量法

注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

货号：BC0195

规格：100T/48S

产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存，用前混匀即可；试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。

多酚氧化酶(PPO)活性生化检测试剂盒产品说明：PPO（EC1.10.3.1）是一种广泛存在于植物体内的含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。PPO能够催化邻苯二酚产生邻苯二醌，后者在410nm有特征光吸收。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

1. 收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
2. 称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长410nm，蒸馏水调零。

2.样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）

充分混匀，5000g，常温离心10min，收集上清，取200μL微量玻璃比色皿或96孔板中，410nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A测定-A对照。

注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5min沸水浴处理。

多酚氧化酶(PPO)活性生化检测试剂盒PPO活性计算：

a. 用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下

（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。PPO（U/mgprot）=ΔA÷0.01×V反总÷（Cpr×V样）÷T=60×ΔA÷Cpr

1. 按样本鲜重计算：单位的定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。PPO（U/g鲜重）=ΔA÷0.01×V反总÷（W÷V样总×V样）÷T=60×ΔA÷W
2. 按细菌或细胞数量计算：单位的定义：每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。PPO（U/104cell）=ΔA÷0.01×V反总÷（500÷V样总×V样）÷T=0.12×ΔAb.

b. 用96孔板测定的计算公式如下

（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.005定义为一个酶活力单位。PPO（U/mgprot）=ΔA÷0.005×V反总÷（Cpr×V样）÷T=120×ΔA÷Cpr

1. 按样本鲜重计算：单位的定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.005定义为一个酶活力单位。PPO（U/g鲜重）=ΔA÷0.005×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T=120×ΔA÷W
2. 按细菌或细胞数量计算：单位的定义：每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.005定义为一个酶活力单位。PPO（U/104cell）=ΔA÷0.005×V反总÷（500÷V样总×V样）÷T=0.24×ΔAV反总：反应体系总体积，0.3mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞数量，500万；T：反应时间，10min。

注意事项：不同样本的多酚氧化酶适合的反应温度略有差别，可在25-37℃之间进行调节。

相关文献：

《Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)》 作者:Beibei Li，Yang Ding，Xiuli Tang，Guoyi Wang，Shujuan Wu，Xianxian Li，Xiaofei Huang，Tongtong Qu，Jifeng Chen 期刊:Food and Bioprocess Technology 影响因子:3.032 PMID:
《MTA1 promotes the invasion and migration of pancreatic cancer cells potentially through the HIF-α/VEGF pathway》 作者:B Li, Y Ding, X Tang, G Wang, S Wu, X Li 期刊:Journal of Receptor and Signal Transduction Research. 影响因子:2.998 PMID:30396299