γ-谷氨酰转肽酶活性检测试剂盒 微量法

γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号: BC1225
规格: 100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一工作液（在试剂一瓶中配制）：临用前配制，把5mL试剂二倒入试剂一瓶中，充分溶解（室温过低时可以40℃水浴促进溶解）。2-8℃可以保存4周

2. 工作液的配制：临用前根据样本量按试剂一工作液：试剂三=250μL：920μL（共1.17mL，约6T）的比例进行配制，限当天用完。

产品说明：
γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，产生*氨酸盐，在细胞外谷*甘肽新陈代谢中起了重要的作用。
γ-GT催化谷氨酰对硝*γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰*氨酸，生成对硝*,在405nm有特征光吸收；通过测定405nm光吸收增加速率，来计算γ-GT酶活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：
培养细胞中γ-GT活性测定时，细胞中γ-GT的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞（防止因为蛋白质变性导致酶失活）。
实验实例：

1. 取0.1g肾脏加入1mL提取液进行匀浆研磨，于4℃，10000rpm离心15min，取上清液稀释4倍按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA =（A2测定-A1测定）-（A2空白-A1空白）=（2.088-0.638）-（0.435-0.425）=1.44，按样本质量计算酶活得：γ-GT（U/g 质量）=0.845×ΔA÷W×4（稀释倍数）=48.67 U/g 质量。

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