氧化型谷*甘肽(GSSG)含量检测试剂盒 微量

氧化型谷*甘肽含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1185
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：有毒易挥发试剂，涉及该试剂的步骤建议在通风橱内操作。

2. 试剂五：临用前加入2.5 mL蒸馏水，溶解后-20℃分装可保存4周，避免反复冻融。

3. 试剂六工作液：先将试剂六内液体离心至底部再用移液枪吹打混匀使用。临用前根据样本数量按照试剂六：蒸馏水=1μL：20μL（21μL，约10T）的比例配制备用，现用现配。

4. 标准品：10mg氧化型谷*甘肽。临用前加入1 mL蒸馏水，充分溶解，浓度为10 mg/mL，2-8℃可保存4周。

产品说明：
氧化型谷*甘肽（*）是谷*甘肽（GSH）的氧化形式，又称为二硫代谷*甘肽，是两分子的谷*甘肽氧化而成。*会被谷*甘肽还原酶还原成GSH，因此机体中大多数是以还原型形式存在。测定细胞内GSH和*含量以及GSH/*比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。本试剂盒利用谷*甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝*甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-*甲酸，2-硝基-5-*甲酸在波长412nm处具有最大光吸收的特点，通过2-乙烯吡啶抑制样本中原有的还原型谷*甘肽，然后利用谷*甘肽还原酶将*还原为GSH，借此测定氧化型谷*甘肽的含量。

技术指标：
低检出限：3.211 μg/mL
线性范围：3.9-125 μg/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、分析天平、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、匀浆器/研钵/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件

注意事项：

1. 若不确定样本中*含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。

2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

3. 因为试剂一中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。如需测定蛋白含量，需另取组织。

实验实例：

1. 取0.1064g大鼠肝脏加入1mL试剂一进行冰浴匀浆，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定= A2测定-A1测定=0.240-0.149=0.091，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.118-0.114=0.004，ΔA测定-ΔA空白=0.087，根据标准曲y=0.0117x - 0.0122， R²=0.9989，x=8.479，按样本质量计算得：

*含量（μg/g 质量）=x÷W =79.690 μg/g 质量。

1. 取0.1050g韭菜叶片加入1mL试剂一进行冰浴匀浆，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定= A2测定-A1测定=0.198-0.150=0.048，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.118-0.114=0.004，ΔA测定-ΔA空白=0.044，根据标准曲线y=0.0117x - 0.0122，R²=0.9989，x=4.803，按样本质量计算得：

*含量（μg/g 质量）=x÷W =45.74 μg/g 质量。
相关发表文献：
[1] Ming Song,Fangfang Chen,Yihui Li,et al. rimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin-induced skeletal muscle injury. Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle. November 2017;(IF10.754)
[2] Hua Li,Lanying Wang,Yanping Luo. Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (−)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan. Molecules. October 2018;(IF3.06)
参考文献：

1. Alpert A J, Gilbert H F. Detection of oxidized and reduced glutathione with a recycling postcolumn reaction[J]. Analytical biochemistry, 1985, 144(2): 553-562.

2. Owens C W I, Belcher R V. A colorimetric micro-method for the determination of glutathione[J]. Biochemical Journal, 1965, 94(3): 705.

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