硫氧还蛋白还原酶活性检测试剂盒 微量法

硫氧还蛋白还原酶（TrxR）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1155
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂三：临用前取1支加入1.667 mL蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃保存2周。

2. 试剂四：体积量少，请离心后再使用。临用前根据样本数量将试剂四用无水乙醇稀释10倍后使用。

产品说明：
    TrxR（EC，EC 1.8.1.9）是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR与GR活性类似，催化*还原生成GSH，是谷*甘肽氧化还原循环关键酶之一。
TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP⁺，TNB在412nm有特征吸收峰，但还原型谷*甘肽与DTNB同样能反应生成TNB，因此本试剂盒利用2-乙烯吡啶抑制样本中原有的还原型谷*甘肽，通过测定412nm波长处TNB的增加速率，即可计算TrxR活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、可调节移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、蒸馏水、冰和无水乙醇。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：

1. 哺乳动物组织及血液制品TrxR活力测定时，一般须用蒸馏水稀释5倍左右；测定过程操作须迅速。

2. 由于试剂一中含有一定浓度的蛋白（约0.1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。

实验实例：

1. 取0.1g月季花朵加入1mL 试剂一进行冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上，按照测定步骤操作，用微量玻璃比色皿测得计算ΔA =（A2测定-A1测定）-（A2空白-A1空白）=（0.8600-0.8177）-（0.0792-0.0727）=0.00358，按样本质量计算酶活得：

TrxR活性（U/g 质量）=147×ΔA÷W=53.626 U/g 质量。

1. 取0.1g小鼠肝脏样本加入1mL 试剂一进行冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清稀释4倍置冰上，按照测定步骤操作，用微量玻璃比色皿测得计算ΔA =（A2测定-A1测定）-（A2空白-A1空白）=（0.8538-0.2101）-（0.0792-0.0727）=06371，按样本质量计算酶活得：

TrxR（U/g 质量）=147×（ΔA测定管-ΔA空白管）÷W×4（稀释倍数）=3746.148 U/g 质量。
相关发表文献：

1. Li B, Li D, Jing W, et al. Biogenic selenium and its hepatoprotective activity[J]. Scientific reports, 2017, 7(1): 1-11.

2. Zhang L, Fan J, He J, et al. Regulation of ROS–NF‐κB axis by tuna backbone derived peptide ameliorates inflammation in necrotizing enterocolitis[J]. Journal of cellular physiology, 2019, 234(8): 14330-14338.

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