Ca++Mg++——ATP酶活性检测试剂盒 微量法

Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC0965
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂三：临用前取1支加入1 mL蒸馏水充分混匀待用；现用现配。用不完的试剂-20℃分装保存一周。

2. 试剂六：临用时加入5 mL蒸馏水，溶解后2-8℃保存两周。

3. 试剂七：临用时加入5 mL蒸馏水，溶解后2-8℃保存两周。

4. 标准品：10mmol/L 标准磷贮备液。将标准品20倍稀释，即取0.1 mL标准品加1.9 mL蒸馏水充分混匀，配成0.5 μmol/mL标准磷应用液，现用现配。

5. 定磷剂的配制：按H₂O：试剂六：试剂七：试剂八=2:1:1:1（体积比）比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂根据样本量现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
产品说明：
Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。
根据Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性高低。


注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：

   可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：

1. 由于每一个样都必须做对照，本试剂盒100管只能测48份Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶。

2. 此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格无磷。避免磷污染是检测成败的关键。

实验实例：

1. 取0.1g胰腺加入1mL试剂一进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清置冰上，按照测定步骤操作，使用96孔板测得ΔA测定=0.535-0.238=0.297，ΔA标准=0.280-0.043=0.237，按样本质量计算酶活得：

Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶活力(U/g 质量) =7.5×ΔA测定÷ΔA标准÷W=93.99 U/g 质量。

1. 取0.1g柳树加入1mL试剂一进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清置冰上，按照测定步骤操作，使用96孔板测得ΔA测定=0.105-0.099=0.006，ΔA标准=0.280-0.043=0.237，按样本质量计算酶活得：

Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶活力(U/g 质量) =7.5×ΔA测定÷ΔA标准÷W=1.90 U/g 质量。
相关发表文献：

1. Yupu Jing,Hongli An,Shanjing Zhang,et al. Protein kinase C mediates juvenile hormone-dependent phosphorylation of Na⁺. Journal of Biological Chemistry. November 2018;(IF4.106)

参考文献：

1. Datiles M J, Johnson E A, McCarty R E. Inhibition of the ATPase activity of the catalytic portion of ATP synthases by cationic amphiphiles[J]. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics, 2008, 1777(4): 362-368.

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