羧酸酯酶(CarE)活性检测试剂盒 微量法

羧酸酯酶（CarE）活性检
测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0845
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前取1瓶先加入1.25mL无水乙醇，震荡使其大部分溶解，再加入8.75mL试剂三，震荡至充分溶解，用不完的试剂2-8℃保存一周（1瓶粉剂溶解后可做100T，为了延长使用时间，此产品多给1瓶粉剂）；

2. 试剂二：临用前取1瓶试剂二加入8 mL试剂三震荡使其充分溶解，临用前配制本试剂溶解后为淡黄色，且在常温下不稳定，建议根据样本量取适当配好的试剂二置于冰上待用，剩余试剂分装后置于-20℃保存一周，禁止反复冻融。

产品说明：
哺乳动物CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于丝*酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰胆*及其类似物。CarE参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固蓝显色；在450nm光吸收增加速率，计算CarE活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵/匀浆器、超声破碎仪，蒸馏水，无水乙醇。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：

1. 试剂二为-20℃储存试剂，在常温下不稳定，一般常温放置2-3小时即可明显发现液体由浅黄色变为浅褐色（液体变褐色视为变质，不可用）。建议试验前根据样本量计算所需试剂二的用量，在试剂二溶解后，留取所需用量置于冰上待用，剩余试剂可分装后-20℃储存。

2. 动物组织样本一般稀释8倍或更大稀释倍数后进行操作测定。

3. 当吸光值大于1时，建议将样本稀释后测量。计算公式注意乘以稀释倍数。

4. 为保证反应时间的准确性，建议逐一比色；如想用96孔板对多样本同时检测，建议使用排枪，且一次最多8个或12个孔（8道排枪或12道排枪）。

实验实例：

1. 取0.1g小鼠肝脏加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清用蒸馏水稀释32倍后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA空白管=A2空-A1空=0.148-0.122=0.026，ΔA测定管=A2测-A1测=0.457-0.118=0.339，按样本质量计算酶活得：CarE酶活(U/g质量)=8×(ΔA测定管-ΔA空白管)÷W×F=8×(0.339-0.026)÷0.1×32=801.28 U/g 质量。

1. 取0.1g小鼠肾脏加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清用蒸馏水稀释8倍后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA空白管=A2空-A1空=0.148-0.122=0.026，ΔA测定管=A2测-A1测=0.28-0.124=0.156，按样本质量计算酶活得：CarE酶活(U/g质量)=8×(ΔA测定管-ΔA空白管) ×F=8×(0.156-0.026)÷0.1×8=83.2 U/g 质量。

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