3-磷酸甘油酸激酶检测试剂盒 微量法

3-磷酸甘油酸激酶（PGK）活
性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC2255
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前加入2.5 mL蒸馏水充分溶解后待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

2. 试剂三：临用前加入1 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

3. 试剂四：临用前加入1 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

4. 试剂五：粉剂置于试剂瓶内棕色管中。临用前加入4 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

5. 工作液的配制：按照蒸馏水：试剂一：试剂二：试剂三：试剂四：试剂五=6:10:2:1:1:4的体积比例充分混匀，现用现配。

产品说明：
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，也是生物得以生存的关键酶。广泛存在于动植物和微生物体内，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，引起340nm处的吸光度下降，即反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：

1. ΔA大于0.8或者A1测定小于0.9时（96孔UV板是当ΔA大于0.5或者A1测定小于0.6时），建议将粗酶液用提取液稀释后再进行测定。当ΔA小于0.01时，可以延长反应时间（10min或15min）或增加样本体积来测定。

2. 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。

3. 样本的蛋白浓度需自行测定，由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以测定样本蛋白浓度时需扣除提取液自身蛋白浓度。

实验实例：

1. 取0.1g白菜加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后再用提取液稀释4倍，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算ΔA测定管=A1测定-A2测定=1.05-0.5559=0.4941，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9966-0.9941=0.0025，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.4941-0.0025=0.4916，按样本质量计算酶活得：PGK（U/g 质量）=321.54×ΔA÷W×稀释倍数= 321.54×0.4916÷0.1×4=6322.7626 U/g 质量。

2. 取0.1g小鼠肌肉加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后再用提取液稀释20倍，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算，ΔA测定管=A1测定-A2测定=0.9327-0.4518=0.4809，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9966-0.9941=0.0025，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.4809-0.0025=0.4784，按样本质量计算酶活得：PGK（U/g 质量）=321.54×ΔA÷W×稀释倍数= 321.54×0.4784÷0.1×20=30764.9472 U/g 质量。

3. 取骆驼血清样本100μL按照测定步骤直接测定，用微量石英比色皿测得计算ΔA测定管=A1测定-A2测定= 1.0435-0.9793=0.0642，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9966-0.9941=0.0025，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.0642-0.0025=0.0617，按液体体积计算酶活得：PGK（U/mL）=321.54×ΔA=321.54×0.0617=19.8390 U/mL。

相关系列产品： 
BC2270/BC2275 果糖-1,6-二磷酸醛缩酶（FBA）活性检测试剂盒
BC2240/BC2245 果糖-1,6-二磷酸（FDP）含量检测试剂盒
BC0530/BC0530 果糖-6磷酸激酶（PFK）活性检测试剂盒

3-磷酸甘油酸激酶检测试剂盒 微量法 3-磷酸甘油酸激酶检测试剂盒 微量法