中性蛋*酶（NP）活性检测试剂盒 微量法

中性蛋*酶（NP）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC2295
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前加入4mL蒸馏水，充分溶解。

2. 试剂二：临用前加入4mL 提取液，沸水浴中搅拌溶解。

3. 标准品：20μmol/mL标准酪*酸。

产品说明：
 NP在一定的温度和中性pH条件下，催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点，中性蛋*酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。中性条件下，NP催化酪蛋白水解产生酪*酸；在碱性条件下，酪*酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
研钵/匀浆器、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP管、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称约0.1g组织，加入1mL提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待测。
二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一、试剂二和试剂三置于30℃水浴保温30min以上。

3. 标准溶液的配制：临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL标准溶液使用，现用现配。

4. 样本测定 (1.5mLEP管中分别加入下列试剂) ：

注意事项：
若反应较弱，（A测定管-A对照管）差值较小，可适当延长反应时间（20-30min），即第一步水浴时间，最后计算酶活时对公式进行修改。
实验实例：

1. 取0.1g兔脾脏加入1mL提取液冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清，即粗酶液，置冰上，之后照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.132-0.123=0.009，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.259-0.045=0.214。按样本质量计算酶活得：

NP活性（U/g 质量）=0.125×ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.125×0.009÷0.214÷0.1=0.0526 U/g 质量。
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