结合态淀粉合成酶活性检测试剂盒 微量法

结合态淀粉合成酶（GBSS）活性检
测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC3295
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前取1瓶试剂二A加入8mL试剂一，缓慢加热，逐渐升温至煮沸使其溶解，冷却后加入1支试剂二B和1支试剂二C混合溶解，这样可以分两批配制并且测定，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融。

2. 试剂三：临用前取1瓶试剂三B加入5mL试剂三A溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。

3. 试剂四：临用前先离心，取12.5 μL试剂四加入4 mL溶解好的试剂三混合备用（约53T），现用现配，也可根据样本量按比例配制。

4. 试剂五：临用前取1瓶试剂五B加入8mL试剂五A和1支试剂五C溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。

5. 试剂六：临用前取1支加入208 μL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融。

6. 试剂七：临用前加入2mL蒸馏水，用不完的试剂-20℃分装保存8周，避免反复冻融。

产品说明：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链淀粉的合成。
GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的 丙 酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP⁺还原为NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH的增加量，可以计算GBSS活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件

实验实例：

1. 取0.1g肝脏加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混匀，置冰上，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算ΔA=A2-A1=0.2685-0.2532=0.0153，按样本质量计算酶活得：

GBSS活性（U/g 质量）=43.2×ΔA÷W=6.6096 U/g 质量。

1. 取0.1g柳树加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混匀，置冰上，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算ΔA=A2-A1=2.2252-2.2184=0.0068，按样本质量计算酶活得：

GBSS活性（U/g 质量）=43.2×ΔA÷W=2.9376 U/g 质量。
参考文献：

1. Jiang H, Dian W, Wu P. Effect of high temperature on fine structure of amylopectin in rice endosperm by reducing the activity of the starch branching enzyme[J]. Phytochemistry, 2003, 63(1): 53-59.

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