酪*酸酶活性检测试剂盒 微量法

酪*酸酶（Tyr）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照说明书操作。
货号：BC4055
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前每瓶加入7 mL提取液充分溶解待用，现配现用。溶解后易氧化，24h内要尽快用完。

2. 试剂三：临用前加入1.65mL蒸馏水充分溶解待用，该试剂为饱和溶液，若有析出可置于45℃水浴锅加热溶解；用不完的试剂2-8℃保存4周。

产品说明：
酪*酸酶（tyrosinase；EC1.14.18.1）是一种单酚单加氧酶，是具有双功能的含铜糖蛋白，广泛存在于植物、酵母和动物组织中。酪*酸酶是生物体合成黑色素的关键酶，也是引起果蔬酶促褐变的主要因素，同时也对昆虫的免疫及生长有重要影响。
酪*酸酶催化L-多巴生成多巴醌，其与MBTH生成紫红色物质，在505nm下有特征吸收峰，据此可以计算出酪*酸酶的活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
需自备的仪器和用品：
   可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰、蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：
1、当样本ΔA测定大于1时，建议将样本用蒸馏水稀释后测定。计算时注意同步修改计算公式。
实验实例：

1. 取0.1055g大鼠脾组织加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用96孔板测得ΔA测定=A测定-A空白=0.153-0.083=0.070，按样本质量计算酪*酸酶活性得：酪*酸酶活性（U/g 质量）=103.7×ΔA测定÷W×F=68.81U/g 质量。

2. 取0.1020g绿萝加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后用蒸馏水稀释8倍按照测定步骤操作，用96孔板测得ΔA测定=A测定-A空白=1.037-0.083=0.954，按样本质量计算酪*酸酶活性得：酪*酸酶活性（U/g 质量）=103.7×ΔA测定÷W×F =7759.2U/g 质量。

3. 取27μL猪血清后按照测定步骤操作，用96孔板测得ΔA测定=A测定-A空白=0.429-0.083=0.346，按样本液体体积计算酪*酸酶活性得：酪*酸酶活性（U/mL）=103.7×ΔA测定=35.88U/mL。

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