莽草酸脱氢酶活性检测试剂盒其它系列BC4180-50T/48S-北京索莱宝科技有限公司

品牌	SOLARBIO/索莱宝	CAS	详询
分子式	详询	纯度	详询
分子量	详询	货号	BC4180
规格	50T/48S	供货周期	现货
主要用途	莽草酸脱氢酶(SD)活性检测	应用领域	环保,化工,生物产业,农林牧渔,综合

莽草酸脱氢酶（SD）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
货号: BC4180
规格: 50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体60 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂一	液体20 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×1瓶	2-8℃保存
试剂三	粉剂×2瓶	-20℃保存

溶液的配制：

提取液：内含不溶物，用前摇匀。
试剂二：临用前加入10 mL蒸馏水溶解。
试剂三：临用前每瓶加入11 mL蒸馏水溶解。
工作液的配制：根据用量按照试剂一：试剂二：试剂三为7:4:8的体积比例充分混匀，现用现配，用前25℃预热15min。

产品说明：
莽草酸途径是存在于植物和微生物中的一条重要的代谢途径，莽草酸脱氢酶(EC 1.1.1.25) 是莽草酸合成代谢途径中催化第四步反应的关键酶。
莽草酸脱氢酶催化莽草酸和NADP产生NADPH，检测340nm下的吸光值增加速率来表示SD活性。
Shikimic Acid +NADP NADPH(340nm)
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（加入前摇匀））进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
2、细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3、液体：直接检测。
二、测定步骤具体操作步骤详见“产品资料"附件

紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
工作液25℃预热10min以上。
操作表：在1mL石英比色皿中分别加入下列试剂：

试剂名称	空白管	测定管
工作液（µL）	950	950
样本（µL）	-	50
蒸馏水（µL）	50	-
加入样本即开始计时，充分混匀后于340nm处测定20s时的吸光值A1和5min20s时的吸光值A2，计算ΔA测定管=A2测定-A1测定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。

注意事项：

样本提取上清液置于冰上待测，且样本提取完成后建议2h内测完。
样本的蛋白浓度需自行测定，由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以测定样本蛋白浓度时需扣除提取液自身蛋白浓度。
ΔA大于1时，建议将样本稀释后再进行测定。当ΔA小于0.01时，可以延长反应时间（10min或15min）来测定。
空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。

实验实例：

取0.1g萝卜叶，加入1mL提取液，进行样本处理，取上清按照测得步骤操作，测得计算ΔA测定管=A2测定-A1测定=1.441-1.201=0.24，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.24，按照样本质量计算得：SD酶活（U/g 质量）=643×ΔA÷W=1543.2 U/g 质量。

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