4-香豆酸：辅*A连接酶活性检测试剂盒 微量

4-香豆酸：辅*A连接酶（4CL）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号: BC4225
规格: 100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 提取液：内含不溶物，使用前摇匀；

2. 试剂二：临用前加入3 mL蒸馏水溶解，可以分装后-20℃保存，避免反复冻融；

3. 试剂四：临用前用4 mL蒸馏水溶解备用，可以分装后-20℃保存，避免反复冻融；

4. 试剂五：加入1 mL乙醇溶解，临用前用蒸馏水稀释40倍后备用，现用现配；

5. 工作液的配制：按体积比将试剂二：试剂三：试剂四：试剂五=1:1:1:1的比例配制工作液，现用现配。

产品说明：
4-香豆酸：辅*A连接酶（4-coumarate:CoA ligase，4CL）是木质素生物合成的关键酶之一，主要催化肉桂酸及其羟基或者甲氧基衍生物生成相应的辅*A酯，这些中间产物随后进入苯丙类衍生物支路合成途径。该酶主要存在于高等植物、酵母和菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量而提高其品质提供依据。4CL催化4-香豆酸和CoA生成4-香豆酸CoA，其在333nm下测有特征吸收峰，测定4-香豆酸CoA的生成速率，即可反映4CL活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。

操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件

注意事项：

1. 若ΔA大于0.5，将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。

2. 建议一次测定不要测定过多样本以免耽误过多的酶促反应时间。

3. 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。

实验实例：

1. 取0.1g芥菜加1mL提取液进行样本处理，取上清后按照测定步骤操作，使用微量石英比色皿测得ΔA测定管=A2测定管-A1测定管=0.7425-0.5851=0.1574，ΔA空白管= A2空白管-A1空白管=0，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.1574，按样本质量计算酶活得：4CL（U/g 质量）=476.19×ΔA÷W=476.19×0.1574÷0.1=749.52 U/g 质量。

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