蛋白质游离巯基含量检测试剂盒 微量法

提取液配制：临用前根据样本量按照提取液一：提取液二=1mL：1 mL进行配制，请勿一次性全部混合。

若试剂二有析出，可置于37℃水浴加热至澄清透明后使用。

标准品：10mg还原型谷*甘肽（GSH）。临用前加入1.3mL蒸馏水配置成25μmol/mL，2-8℃保存4周。

0.125μmol/mL标准品配制：取50μL 25μmol/mL标准品，加入950μL蒸馏水，充分混匀，配制成1.25μmol/mL的标准品；然后取100μL 1.25μmol/mL标准品，加入900μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.125μmol/mL的标准品备用，现配现用。

组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，3000rpm 离心10min，弃上清。在沉淀中加入2mL试剂一，搅匀后溶解沉淀，沉淀溶解液作为样本进行实验。（注：（1）植物叶片等纤维含量较高的样本，溶解沉淀后4℃ 3000rpm离心3min，取上清作为样本进行实验,；（2）加入试剂一后会有大量气泡产生，请缓慢加入，建议使用5mL的EP管）。

细菌/细胞：按照细菌/细胞数量（10⁶个）：提取液体积（mL）为5~10：1的比例（建议5百万细菌/细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎（功率200W，超声3秒，间隔10秒，总时间3min）后，于4℃，3000rpm 离心10min，弃上清。在沉淀中加入2mL试剂一，搅匀后溶解沉淀，沉淀溶解液作为样本进行实验。（注：（1）若沉淀溶解不全，可4℃ 3000rpm离心3min，取上清作为样本进行实验；（2）加入试剂一后会有大量气泡产生，请缓慢加入，建议使用5mL的EP管）。

血清/血浆、牛奶等液体：取100μL液体样本加入0.9mL丙 酮，4℃，3000rpm 离心10min，弃上清。在沉淀中加入2mL试剂一，搅匀后溶解沉淀，沉淀溶解液作为样本进行实验。（注：若测定数值偏小，可改变样本与丙 酮的比例，如取0.2mL液体样本加入0.8mL丙 酮或0.3mL液体样本加入0.7mL丙 酮，注意同步修改计算公式）。

可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，分光光度计用蒸馏水调零。

操作表：（建议在2mL的EP管中操作）

按照样本蛋白浓度计算：

按照样本质量计算：

按照液体体积计算：

按照细胞/细菌数量计算：

若样本ΔA测定<0.01，可适当增大样本量后测定，注意同步修改空白管和标准管及计算公式；若样本ΔA测定>1.5，可用试剂一稀释沉淀溶解液后测定，注意同步修改计算公式中的稀释倍数。

可使用BCA法测定蛋白浓度。

取100μL马血清，按照测定步骤操作，用96孔板测得ΔA测定=A测定-A对照=0.113-0.047=0.066，ΔA标准=A标准-A空白=0.417-0.105=0.312，按样本液体体积计算蛋白质游离巯基含量得：蛋白质游离巯基含量（μmol/mL）=2.5×ΔA测定÷ΔA标准×F =0.529μmol/mL。

取0.1036g鼠肝，按照测定步骤操作，用96孔板测得ΔA测定=A测定-A对照=0.261-0.105=0.156，ΔA标准=A标准-A空白=0.417-0.105=0.312，按样本质量计算蛋白质游离巯基含量得：蛋白质游离巯基含量（μmol/g 质量）=0.25×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F =1.207μmol/g 质量。

取0.1078g黄豆粉，沉淀溶解液用试剂一稀释2倍后，按照测定步骤操作，用96孔板测得ΔA测定=A测定- A对照=0.123-0.070=0.053，ΔA标准=A标准-A空白=0.417-0.105=0.312，按样本质量计算蛋白质游离巯基含量得：蛋白质游离巯基含量（μmol/g 质量）=0.25×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F =0.788μmol/g 质量。