组织铜含量检测试剂盒 离子

组织铜（Cu）含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

货号：BC5560

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：若有试剂析出，置于37℃水浴溶解即可。

2. 标准品：10mmol/L（即10000µmol/L）硫酸铜标准液。

产品说明：

铜（Cu）是人体必需的微量元素之一，也是蛋白质以及酶的重要组成部分。可以存在于红细胞的内外，主要功能是辅助造血，即催化血红蛋白的合成。铜元素可以适当促进人体的骨骼发育，促进人体神经系统以及脑部发育，维持婴幼儿的正常生长发育，因此，测定组织内铜离子含量可知体内是否缺铜。

酸性条件下，Cu²⁺从铜蓝蛋白和清蛋白中解离出来，与络合剂3,5-二溴-PAESA反应，产生紫色络合物，在580nm处有特征吸收峰，在一定范围内吸光度与浓度成正比，从而计算出Cu²⁺浓度。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1︰5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清待测。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至580nm，蒸馏水调零。

2、 80µmol/L标准溶液配制：取100µL 10mmol/L的标准液加入400μL 蒸馏水混匀，即2000µmol/L的标准品；再取40μL 2000µmol/L的标准品和960μL 蒸馏水混合，即配成80µmol/L标准溶液。

3、 实验前根据样本量取部分试剂一37℃预热10min。

4、 操作表：（在1.5mLEP管中依次加入以下试剂）

三、组织铜含量的计算

1. 按样本质量计算

铜含量（μmol/g）=ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷W =0.08×ΔA测定÷ΔA标准÷W

2. 按样本蛋白浓度计算

铜含量（μmol/g prot）=ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷（Cpr×V提取）=80×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr

C标准：标准品浓度，80µmol/L；V提取：前处理中蒸馏水体积，0.001L；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。

注意事项：

1. 37℃孵育5min后请立即测定吸光度，若样本数量过多，可分批次测定，尽量确保在20min内完成测定。

2. 如果样本测定吸光值大于0.5，建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定，注意同步修改计算公式。

3. 如果样本测定吸光值小于0.005或接近空白管吸光值，可适当增大样本量，空白管和标准管也需要进行相应调整。

实验实例：

1. 称取0.1g鼠肺加入1mL蒸馏水进行匀浆研磨，离心取上清后按照测定步骤操作，使用1mL玻璃比色皿测得计算ΔA测定=A测定-A空白=0.126-0.071=0.055，ΔA标准=A标准-A空白=0.384-0.071=0.313，按样本质量计算含量得：

组织铜含量（μmol/g）=0.08×ΔA测定÷ΔA标准÷W =0.141μmol/g。

2. 称取0.1010g杏仁加入1mL蒸馏水进行匀浆研磨，离心取上清后按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算ΔA测定=A测定-A空白=0.267-0.071=0.196，ΔA标准=A标准-A空白=0.384-0.071=0.313，按样本质量计算含量得：

组织铜含量（μmol/g）= 0.08×ΔA测定÷ΔA标准÷W =0.496μmol/g。

3. 称取0.1053g黄豆粉加入1mL蒸馏水进行匀浆研磨，离心取上清后按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算ΔA测定=A测定-A空白=0.342-0.071=0.271，ΔA标准=A标准-A空白=0.384-0.071=0.313，按样本质量计算含量得：

组织铜含量（μmol/g）=0.08×ΔA测定÷ΔA标准÷W =0.658μmol/g。

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