海藻糖酶（THL）活性检测试剂盒 微量法

海藻糖酶（THL）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2515
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前取1支加入0.6mL试剂一，充分溶解待用，用不完的试剂2-8℃保存1周；

2. 标准品：含10mg无水*萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1mL蒸馏水溶解，配制成10mg/mL标准液待用，4℃可保存2周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，2-8℃保存4周；

产品说明：
THL（EC 3.2.1.28）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。海藻糖酶主要功能在于生物体分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供应。
采用3,5－二硝基水杨酸法测定THL催化海藻糖产生的还原糖的含量。还原糖与3,5－二硝基水杨酸共热生成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比，由此判断THL活性的高低。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、超声破碎仪、低温离心机、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液充分匀浆以破碎并裂解细胞，超声波破碎，（冰浴，功率200W，超声开3秒，关10秒，重复30次）；8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织的处理：称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。8000g，4℃下离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）的处理：吸取约0.1mL血清（浆），加入0.9mL提取液，冰浴中匀浆。8000g，4℃下离心10min，
取上清，置冰上待测。

相关发表文献：

1. Yan P, Wen C, Zhang S, et al. A toxicological, metabonomic and transcriptional analysis to investigate the property of mulberry 1-deoxynojirimycin against the growth of Samia cynthia ricini[J]. Pesticide biochemistry and physiology, 2018, 152: 45-54.

2. Jing Li,Yabing Duan,Chuanhong Bian,et al. Effects of validamycin in controlling Fusarium head blight caused by Fusarium graminearum: Inhibition of DON biosynthesis and induction of host resistance. Pesticide Biochemistry and Physiology. January 2019;153:152-160.(IF2.87)

3. Goddijn O J M, Verwoerd T C, Voogd E, et al. Inhibition of trehalase activity enhances trehalose accumulation in transgenic plants[J]. Plant physiology, 1997, 113(1): 181-190.

4. Küenzi M T, Fiechter A. Changes in carbohydrate composition and trehalase-activity during the budding cycle of Saccharomyces cerevisiae[J]. Archiv für Mikrobiologie, 1969, 64(4): 396-407.

参考文献：
[1] Goddijn O J M, Verwoerd T C, Voogd E, et al. Inhibition of trehalase activity enhances trehalose accumulation in transgenic plants[J]. Plant physiology, 1997, 113(1): 181-190.
[2] Küenzi M T, Fiechter A. Changes in carbohydrate composition and trehalase-activity during the budding cycle of Saccharomyces cerevisiae[J]. Archiv für Mikrobiologie, 1969, 64(4): 396-407.

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