酸性木聚糖酶活性检测试剂盒 微量法

果胶酶活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2635
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
试剂一：将试剂一A倒入试剂一B于50℃水浴中溶解（期间可拿出振荡数次）。该试剂易长菌，配制完成后可-20℃分装保存，可保存12周。
标准品：10mg半乳糖醛酸。临用前加入0.943mL蒸馏水，配成50μmol/mL的标准液。
产品说明：
果胶酶（pectinase）是分解果胶的酶类，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于高等植物果实和微生物中，是水果加工中最重要的酶。
果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：

1. A大于1.5时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。

2. 植物果实组织建议将样本用提取液稀释10倍或20倍后再测定。

实验实例：

1. 取0.1g苹果加入1mL提取液进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清稀释10倍之后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA= A测定管-A对照管=1.466-1.357=0.109，带入标准曲线y=0.1428x-0.1022，计算X=1.479μmol/mL，按样本质量计算酶活得：

果胶酶活性（U/g质量）=2x÷W×10（稀释倍数）=295.8 U/g质量。
相关发表文献：

1. Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,et al. Transcription factor VmSeb1 is required for the growth, development, and virulence in Valsa mali. Microbial Pathogenesis. October 2018;132-138.(IF2.581)

2. Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,et al. Two members of the velvet family,VmVeA and VmVelB,affect conidiation,virulence and pectinase expression in Valsa mali. Molecular Plant Pathology. November 2017;(IF4.379)

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