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产品名称:

线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒

产品品牌: SOLARBIO/索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2024-07-31
储存条件
-20℃
中文名称
线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒
有效期
6个月
单位

推荐
若使用96孔板测定,不可使用聚苯乙烯材质,建议使用96孔石英板
英文名称
Mitochondrial complex III / CoQ-cytochrome C reductase Activity Assay Kit
别名
线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性测定试剂盒(CoQ-细*色素C还原酶) 线粒体呼吸

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝CAS详询
分子式详询纯度详询
分子量详询货号BC3245
规格100T/48S供货周期现货
主要用途线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测应用领域环保,化工,生物产业,农业,综合


线粒体呼吸链复合体Ⅲ/CoQ-细*色素C还原酶活性检测试剂盒说明书
微量
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC3245
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件
提取液液体80 mL×12-8℃保存
试剂液体10mL×22-8℃保存
试剂粉剂×2-20保存
试剂液体1.5 mL×12-8℃保存

溶液的配制:

  1. 工作液的配制:临用前1试剂二转移到1试剂一中混合溶解(约62T用不完的试剂-20℃分装保存2周,避免反复冻融。

产品说明:
线粒体复合体EC 1.10.2.2)又称CoQ-细*色素C还原酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分,负责把还原型CoQ的氢传递给细*色素C,生成还原型细*色素C
与氧化型细*色素C不同,还原型细*色素C550nm有特征光吸收,因此550nm光吸收增加速率能够反映线粒体复合体酶活性。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
实验中所需仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板(非聚苯乙烯材质)、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项:

  1. 尽量保持比色皿内反应液温度在37℃或25℃。可以在记录初始吸光度A1后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴中准确反应2分钟,之后迅速取出比色皿并擦干,记录2min时的吸光度。

  2. 当测定吸光值大于1时,建议将样本用提取液稀释后测定,计算公式中注意乘以稀释倍数。

  3. 此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

  4. 由于提取液中含有一定浓度的蛋白(约1mg/mL,所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量(单独测定)

  5. 推荐使用样本蛋白浓度计算酶活,若用样本质量计算,则需加测胞浆提取物酶活,上清和沉淀酶活之和方为总酶活。

  6. 本试剂盒试剂足够完成100管反应。

  7. :使用样本重量计算公式:(样本检测数为100T/24S

A、上清中复合体活力的计算:
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol还原型细*色素C定义为一个酶活力单位。
复合体活力(U/g 质量)=[ΔA1×V反总÷ε×d×109]÷(W÷V提取×V)÷T=262×ΔA1÷W
ΔA1:上清测定值;V反总:反应体系总体积,2×10-4L;ε:细*色素C摩尔消光系数,1.91×104L/mol/cm;d:比色皿光径,1cmV:加入样本体积,0.02mL;V提取:加入提取液体积,1.0mLW:样本质量,gT:反应时间,2min109:单位换算系数,1mol=109nmol
B、沉淀中复合体活力的计算:
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol还原型细*色素C定义为一个酶活力单位。
复合体活力(U/g 质量)=[ΔA2×V反总÷ε×d×109]÷(W÷V提取×V)÷T=52×ΔA2÷W
ΔA2:沉淀测定值;V反总:反应体系总体积,2×10-4L;ε:细*色素C摩尔消光系数,1.91×104L/mol /cm;d:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.02mLV提取:加入提取液体积,0.2mLW:样本质量,gT:反应时间,2min109:单位换算系数,1mol=109nmol
C、样本复合体总活力的计算:
样本复合体总活力即为上清中复合体活力与沉淀中复合体活力之和。
复合体U/g 质量)=262×ΔA1÷W +52×ΔA2÷W
D、以96孔板计算:
将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm进行计算即可。
实验实例:

  1. 取0.1g兔子肾脏进行样本处理将复溶后的沉淀稀释2倍后按照测定步骤操作,使用微量玻璃比色皿测得计算ΔA=A2测定-A1测定)-A2对照-A1对照)=0.9921-0.9077-0.9664-0.9419=0.0599按样本蛋白浓度计算得

复合体U/mg prot=262×ΔA÷Cpr×2(稀释倍数)=262×0.0599÷2.56×2(稀释倍数)=12.26 U/mg prot
相关发表文献:

  1. Ming Song,Fangfang Chen,Yihui Li,et al. Trimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin-induced skeletal muscle injury. Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle. November 2017;(IF10.754)

  2. Liuqin He,Haiwen Zhang,Xihong Zhou. Weanling Offspring of Dams Maintained on Serine-Deficient Diet Are Vulnerable to Oxidative Stress. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. September 2018;(IF4.868)

  3. Qiuli OuYang,Nengguo Tao,Miaoling Zhang. A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum. Frontier in Immunology. February 2018;(IF4.259)

  4. Wang M, Zhang Y, Xu M, et al. Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke-induced airway epithelial cell injury model[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2019, 134: 229-238.

  5. Bao Z, Xu X, Chao H, et al. ERK/Nrf2/HO-1 pathway-mediated mitophagy alleviates traumatic brain injury-induced intestinal mucosa damage and epithelial barrier dysfunction[J]. 2017.

参考文献:

  1. Luo C, Long J, Liu J. An improved spectrophotometric method for a more specific and accurate assay of mitochondrial complex III activity[J]. Clinica Chimica Acta, 2008, 395(1-2): 38-41.

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