线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒微量法

线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒微量法

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微玻璃比色皿/96 孔板（非 聚苯乙烯材质）、研钵、冰和蒸馏水。
复合体Ⅲ的提取：

① 称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

② 4 ℃ 600 g离心10min。

③ 将上清液移另一离心管中，4 ℃ 11000 g离心15min。

④ 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅲ（此步可选做，可以判断线粒体提 取效果）。

⑤ 在沉淀中加入200uL提取液，超声波破碎（功率20％，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于 复合体Ⅲ酶活性测定，并且用于蛋白含测定。

注意事项：

1、尽保持比色皿内反应液温度在37℃或25℃。可以在记录初始吸光度A1后迅速将比色皿连同反 应液一起放入37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中准确反应2分钟，之后迅速取出比色 皿并擦干，记录2min时的吸光度。

2、当测定吸光值大于1时，建议将样品用提取液稀释后测定，计算公式中注意乘以稀释倍数。

3、此法需要自行测定样本蛋白质浓度，推荐本公司BCA蛋白浓度含测定试剂盒。

4、由于提取液中含有蛋白，所以在测定样品蛋白浓度时需要去提取液本身的蛋白含(单独测定)。

5、推荐使用样本蛋白浓度计算酶活，若用样本鲜重计算，则需加测胞浆提取物酶活，上清和沉淀 酶活之和方为总酶活。

6、本试剂盒试剂足够完成 100 管反应。

7、附:使用样本重计算公式：（样本检测数为 100T/24S）

相关文献：

《Weanling Offspring of Dams Maintained on Serine-Deficient Diet Are Vulnerable to Oxidative Stress》 作者:Liuqin He, Haiwen Zhang, and Xihong Zhou 期刊:Oxidative Medicine and Cellular Longevity 影响因子:4.868 PMID:30305866
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影响因子:4.259 PMID:29503638
 

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