品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | CAS | 详询 |
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分子式 | 详询 | 纯度 | 详询 |
分子量 | 详询 | 货号 | BC3325 |
规格 | 100T/48S | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)检测 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农业,综合 |
葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)活性检测试剂盒说明书
微量法
货号: BC3325
规格: 100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体12 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 粉剂×2瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂五 | 液体4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
试剂三:临用前用4 mL蒸馏水溶解备用。
试剂四:临用前用4 mL蒸馏水溶解备用。
标准品:10 μmol/mL磷标准液。临用前用蒸馏水稀释16倍至0.625 μmol/mL的标准溶液备用。
工作液的配制:试剂二中加入5 mL试剂一充分溶解备用。可以将工作液分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
定磷试剂的配制:按H2O:试剂三:试剂四:试剂五(V:V:V:V)=2:1:1:1的比例配制,配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,定磷剂现用现配。
注意:配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
产品说明:
葡萄糖-6-磷酸酶((glucose 6 phosphatase,G6Pase,EC 3.1.3.9)是一种水解磷酸化合物的磷酸酶,广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和无机磷,利用钼蓝法测定无机磷含量的增加,即可反映G6P活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。
操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项:
建议将样本用提取液稀释后再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
若A大于1.5或者显色完成后有沉淀产生,将上清液或者粗酶液用蒸馏水稀释后再进行测定。
定磷试剂应现配现用,正常颜色为浅黄色,如有变色或变蓝则均为失效。
实验实例:
取0.1g稗草加入1mL提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,用96孔板测得A测定管=0.254、A对照管=0.171、A空白管=0.047、A标准管=0.357,计算ΔA=A测定管-A对照管=0.254-0.171=0.083,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.357-0.047=0.31,按样本质量计算酶活得:G6P(U/g 质量)=312.5×ΔA÷ΔA标准÷W=312.5×0.083÷0.31÷0.1=836.6935 U/g 质量。
取0.1g小鼠肝脏加入1mL提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,用96孔板测得A测定管=0.995、A对照管=0.384、A空白管=0.047、A标准管=0.357,计算△A=A测定管-A对照管=0.995-0.384=0.611,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.357-0.047=0.31,按样本质量计算酶活得:G6P(U/g 质量)=312.5×ΔA÷ΔA标准÷W=312.5×0.611÷0.31÷0.1=6159.274 U/g 质量。
取0.1g小鼠血清稀释2倍,直接检测,用96孔板测得A测定管=0.38、A对照管=0.199、A空白管=0.047、A标准管=0.357,计算ΔA=A测定管-A对照管=0.38-0.199=0.181,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.357-0.047=0.31,按血清计算酶活得:G6P(U/mL)=312.5×ΔA÷ΔA标准×稀释倍数=312.5×0.181÷0.31×2=364.9194 U/mL。
相关发表文献:
Fan X, Hou T, Jia J, et al. Discrepant dose responses of bisphenol A on oxidative stress and DNA methylation in grass carp ovary cells[J]. Chemosphere, 2020, 248: 126110.
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