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产品名称:

线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒 微量

产品品牌: 索莱宝 价格: 2800
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-06
线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒 微量
测定意义:复合体Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又称NADH-CoQ 还原酶或NADH脱氢酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体内膜中大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从NADH传递给CoQ,同时可使O2还原生成O2.-,是呼吸电子传递链上产生O2.-的主要部位。测定该酶活性,不仅可以反映呼吸电子传递链(ETC)状态,而且可以反映活性氧

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0515
规格100管/96样供货周期现货
主要用途线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

产品名称:  线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒 微量法

产品英文名:Micro Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅠActivity Assay Kit

产品货号:BC0515                产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格:100管/96样            产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            参考价格:2800
库存状态:现货                          
关键字:       线粒体呼吸链复合体Ⅰ检测试剂盒|  线粒体呼吸链复合体Ⅰ|线粒体呼吸链|试剂盒

简要介绍:
复合体Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又称 NADH-CoQ 还原酶或 NADH 脱氢酶,广泛存在于动物、植物、 微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体内膜中大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从 NADH 传递给 CoQ,同时可使O2还原生成 O2.-,是呼吸电子传递链上产生O2.-的主要部位。 测定该酶活性,不仅可以反映呼吸电子传递链(ETC)状态,而且可以反映活性氧(ROS) 生成状态。

产品详细描述
产品内容:
提取液:液体100mL×1瓶,4保存;  
试剂一:液体20 mL×1瓶,4保存;
试剂二:粉剂×1支,4保存;临用前加入1mL丙tong。
试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存;溶于1mL丙tong,可分装后-20℃保存。临用前再用丙tong100倍稀释后使用,现用现配。
试剂四:粉剂×1支,-20保存;临用前加入2mL蒸馏水,现配现用;   
工作液的配制:临用前将试剂二和试剂三1:1混合,现配现用。
产品说明
复合体Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又称NADH-CoQ 还原酶或NADH脱氢酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体内膜中大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从NADH传递给CoQ,同时可使O2还原生成O2-,是呼吸电子传递链上产生O2.-的主要部位。测定该酶活性,不仅可以反映呼吸电子传递链(ETC)状态,而且可以反映活性氧(ROS)生成状态。
复合体Ⅰ能够催化NADH脱氢生成NAD+,在340nm下测定NADH的氧化速率计算出该酶活性的大小。
试验中所需的仪器和试剂:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/石英96孔板 、研钵/匀浆器、丙tong、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、复合体的提取: 

  1. 称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1.0 mL提取液,用匀浆器或研钵于冰上匀浆。
  2. 4 ℃ 600 g离心10min。
  3. 将上清液移另一离心管中,4 ℃ 11000 g离心15min。
  4. 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅰ(此步可选做,可以判断线粒体提取效果)。
  5. 在沉淀中加入400μL提取液,超声波破碎(功率20%,超声5秒,间隔10秒,重复15次),用于复合体Ⅰ酶活性测定,并且用于蛋白含量测定。

二、测定步骤:

  1. 紫外分光光度计预热30min 以上,调节波长340nm,蒸馏水调零。
  2. 试剂一37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)预热15min。
  3. 操作表:在微量石英比色皿/石英96孔板中分别加入
试剂名称测定管
样本10
试剂一154
工作液20
试剂四16
将上述试剂分别加入比色皿/96孔板后迅速吹打混匀,记录第10s的吸光值A1,尽量在37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)环境中准确反应2分钟,之后迅速取出,记录2min时的吸光度A2,计算ΔA=A1-A2。


三、复合体Ⅰ活力单位的计算:  
(1)以微量石英比色皿计算:
单位定义:每mg 组织蛋白每分钟消耗1 nmol 的NADH 定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅰ活力(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T =1608×ΔA÷Cpr
V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL; T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。
(2)以96孔板计算:将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm进行计算即可。
注意事项:

  1. 为保证实验结果的准确性,需先取1-2个样做预实验,如果测定的吸光值过高(高于1.5),可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。若ΔA大于0.4,需将样本稀释适当倍数(计算公式中乘以相应稀释倍数);若ΔA偏小,则可以通过增加加入的样品体积来提高灵敏度。
  2. 样品蛋白浓度需自行测定,推荐我公司BCA蛋白浓度测定试剂盒。由于提取液中含有蛋白,所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
  3. 推荐使用样本蛋白浓度计算酶活,若用样本鲜重计算,则需加测胞浆提取物酶活,上清和沉淀酶活之和方为总酶活。
  4. 本试剂盒试剂足够完成25管反应。
  5. 附:使用样本重量计算公式:(样本检测数为25T/12S)

A、上清中复合体I活力的计算:
按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位
复合体I活性(U/g= [ΔA1×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W÷V提取×V)÷T
                   =1608×ΔA1÷W
ΔA1:上清测定值;V 反总:反应体系总体积,10-3 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V提取:加入提取液体积,1mL ;V 样:加入样本体积,0.05mL;T:反应时间,2 min;W:样本重量,g
B、沉淀中复合体I活力的计算:
按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位
复合体I活性(U/g= [ΔA2×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W÷V提取×V样本)÷T
                   =643×ΔA2÷W
ΔA2:沉淀测定值;V 反总:反应体系总体积,10-3 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm d:比色皿光径,1cm;V提取:沉淀重悬体积,0.4mL ;V 样:加入样本体积,0.05mL;T:反应时间,2 min;W:样本重量,g
C、样本复合体I总活力的计算:
样本复合体I总活力即为上清中复合体I活力与沉淀中复合体I活力之和。
按样本鲜重计算:
复合体IU/g 鲜重)=1608×ΔA1÷W +643×ΔA2÷W

相关文献:
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