乳酸脱氢酶（LDH）活性检测试剂盒 辅酶系列

乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒 辅酶系列

货号：BC0680

规格：50管/24样

产品内容：

提取液：30mL×1瓶， 4℃保存；

试剂一：液体25 mL×1瓶， 4℃保存；

试剂二：粉剂×1支，-20℃保存，用时加入1.3 mL双蒸水充分溶解备用，配好后可分装成小管-20 ℃保存，可保存两周，禁止反复冻融；

试剂三：液体25 mL×1瓶，4℃保存；

试剂四：液体60 mL×1瓶，4℃保存；

丙酮酸钠标准液：液体1 mL×1支，4℃保存，2mmol/ml。

产品简介：

   LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD⁺/NADH之间互变。

   LDH催化NAD⁺氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

试验中所需的仪器和试剂：

   可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样品测定的准备：  

• 细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500-1000:1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

• 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:5-10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

• 血清（浆）样品：直接检测。

• 丙酮酸钠标准液：取100ml标准液，倍比稀释1、0.5、0.25、0.125、0 mmol/ml，用2、1、0.5、0.25、0.125、0 mmol/ml标准液做标准曲线。

• 
  

二、测定操作：

• 分光光度计预热30min以上，调节波长450nm，蒸馏水调零。

• 样本测定（在EP管中加入下列试剂）

充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min

充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min

充分混匀，室温静置3min，450 nm下测定吸光度，样品计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需要设一个对照管。

根据标准管测定值和浓度做标准曲线，y为标准品浓度，μmol/mL；x为对吸光度。

LDH活力单位计算：

1、计算样品丙酮酸的含量，即将ΔA（x） 带入回归方程中，计算y 值（μmol/mL）

2、血清（浆）LDH活力的计算

单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/mL）=y÷T×10³=66.7×y

3、细胞、细菌和组织中LDH活力的计算

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/mg prot）= y÷T÷Cpr×10³ =66.7×y÷Cpr

需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

（2） 按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/g鲜重）= y÷T÷W×10³ =666.7×y

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/10⁴ cell）= y÷T÷500×10³ =0.133×y

T：反应时间，15 min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，0.1g; 500：细胞或细菌总数，500万；10³：1μmol/mL=10³nmol/mL。

相关文献：

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