乳酸脱氢酶（LDH）活性检测试剂盒 辅酶系列

乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒 辅酶系列

货号：BC0680

规格：50管/24样

产品内容：

提取液：30mL×1瓶， 4℃保存；

试剂一：液体25 mL×1瓶， 4℃保存； 

试剂二：粉剂×1支，-20℃保存，用时加入1.3 mL双蒸水充分溶解备用，配好后可分装成小管-20 ℃保存，可保存两周，禁止反复冻融；

试剂三：液体25 mL×1瓶，4℃保存； 

试剂四：液体60 mL×1瓶，4℃保存；

丙酮酸钠标准液：液体1 mL×1支，4℃保存，2mmol/ml。

产品简介：

    LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD⁺/NADH之间互变。

    LDH催化NAD⁺氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

试验中所需的仪器和试剂：

    可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样品测定的准备：   

• 细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500-1000:1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
• 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:5-10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
• 血清（浆）样品：直接检测。
• 丙酮酸钠标准液：取100ml标准液，倍比稀释1、0.5、0.25、0.125、0 mmol/ml，用2、1、0.5、0.25、0.125、0 mmol/ml标准液做标准曲线。
•  

二、测定操作：

• 分光光度计预热30min以上，调节波长450nm，蒸馏水调零。
• 样本测定（在EP管中加入下列试剂）

充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min

充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min

充分混匀，室温静置3min，450 nm下测定吸光度，样品计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需要设一个对照管。

根据标准管测定值和浓度做标准曲线，y为标准品浓度，μmol/mL；x为对吸光度。

LDH活力单位计算：

1、计算样品丙酮酸的含量，即将ΔA（x） 带入回归方程中，计算y 值（μmol/mL）

2、血清（浆）LDH活力的计算

单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/mL）=y÷T×10³=66.7×y

3、细胞、细菌和组织中LDH活力的计算

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/mg prot）= y÷T÷Cpr×10³ =66.7×y÷Cpr

需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

（2） 按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/g鲜重）= y÷T÷W×10³ =666.7×y

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/10⁴ cell）= y÷T÷500×10³ =0.133×y

T：反应时间，15 min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，0.1g; 500：细胞或细菌总数，500万；10³：1μmol/mL=10³nmol/mL。

 相关文献：

《Effects of Quercetin on Proliferation and H2O2-Induced Apoptosis of Intestinal Porcine Enterocyte Cells》 作者:Zhigang Chen , Qiaoling Yuan , Guangren Xu , Huiyu Chen , Hongyu Lei  and Jianming Su 期刊:Molecules 影响因子:3.06 PMID:
《Enhancing the electricity generation and sludge reduction of sludge microbial fuel cell with graphene oxide and reduced graphene oxide》 作者:Hanmin Zhang,Zongyang Da,Yujie Feng,Yuezhu Wang,Lu Cai,Hongtao,Cui 期刊:Journal of Cleaner Production 影响因子:6.395 PMID:
《Involvement of the two l-lactate dehydrogenase in development and pathogenicity in Fusarium graminearum》 作者:Wenchan ChenLingling WeiYu ZhangDongya ShiWeichao RenZhihui ZhangJin WangWenyong ShaoXiali LiuChangjun ChenEmail authorQingli Gao 期刊:Curr Genet 影响因子:3.464 PMID:30474697
《Caspase 3 may participate in the anti-tumor immunity of dendritic cells》 作者:JinqiangLiuab1FeiWangac1DandanYind1HongweiZhangaFanFeng 期刊:Biochemical and Biophysical Research Communications 影响因子:2.705 PMID:30797554
《Alginate/chondroitin sulfate based hybrid hydrogel with different molecular weight and its capacity to regulate chondrocytes activity.》 作者:Ma Fenbo,Pang Xiangchao,Tang Bin 期刊:Carbohydr Polym 影响因子:6.044 PMID:30553317
《Upregulation of miRNA‐223‐3p ameliorates RIP3‐mediated necroptosis and inflammatory responses via targeting RIP3 after spinal cord injury》 作者:Yang Wang,  Jianhang Jiao,  Pengfei Ren,  Minfei Wu 期刊:Journal of cellular physiology  影响因子:4.522 PMID:30821011

北京索莱宝科技有限公司是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业。

总部位于北京，并在全国设有经销或代理机构。产品因可靠而稳定的质量和较为完善的售后服务确立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，拥有专业的研发和质量检测团队以及的仓储和物流系统。“Solarbio”已经得到全国科研工作者的认可，成为广大经销商推崇的知名品牌。

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索莱宝公司坚持与接轨，注重和企业的合作与交流，并提供产品代理、市场咨询等多项服务。公司将一如既往与世界更多知名品牌合作，不断为广大生物科研工作者提供更优质的产品和服务。公司理念：“为科研服务，为生命尽责”。一个人能够走多远，取决于与谁同行。索莱宝公司期待与各同行精诚合作。

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