乙酰辅酶羧化酶活性检测试剂盒 微量法

乙酰辅酶羧化酶（ACC）活性检测试剂盒（酶法）说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC6025

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1．提取液二：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存。

2．提取液的配制：按提取液一：提取液二=990μL：10μL的比例配制，根据样本量现配现用，禁止将提取液二一次性全部加入提取液一中。

3．试剂一：临用前将试剂一B全部倒入试剂一A，充分溶解待用；可分装后-20℃保存4周，避免反复冻融。

4．试剂二：试剂放于棕色瓶内玻璃瓶中，临用前加入5 mL蒸馏水，充分溶解待用；可分装后-20℃保存4周，避免反复冻融。

5．试剂三稀释液：临用前离心，根据样本量按照试剂三：蒸馏水=1μL：50μL（共51μL，约5T）的比例充分混匀，现配现用。

6．试剂四稀释液：临用前离心，根据样本量按照试剂四：蒸馏水=1μL：125μL（共126μL，约12T）的比例充分混匀，现配现用。

7．试剂五：试剂放于棕色瓶内玻璃瓶中，临用前加入5 mL蒸馏水；可分装后-20℃保存4周，避免反复冻融。

8．试剂六：试剂放于棕色瓶内玻璃瓶中，临用前加入5 mL蒸馏水；可分装后-20℃保存4周，避免反复冻融。

9．工作液的配制：临用前根据样本量按试剂三稀释液：试剂四稀释液：试剂五：试剂六=50μL:50μL:200μL:200μL（共500μL，约5T）的比例配制，现配现用。

产品说明：

乙酰辅酶羧化酶（Acetyl-CoA carboxylase，ACC）在生物体内催化乙酰辅酶羧化生成丙二酰辅酶，是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。

ACC能够催化乙酰辅酶、NaHCO₃和ATP生成丙二酰辅酶、ADP和无机磷，丙 酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH生成NAD⁺，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映ACC活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、分析天平、低温离心机、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、漩涡震荡仪、水浴锅/恒温培养箱、蒸馏水和冰。

操作步骤：具体的操作步骤请见“产品资料"文件

注意事项：

1、 比色皿中反应液的温度必须保持37℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃水浴锅

中，在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

2、 最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。

3、 当A1测定空白时，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定；当样本∆A过小时，建议增大样本量或延长反应时间，注意同步修改计算公式。

4、 由于提取液一中含有蛋白（约1mg/mL），若需要测定样本的蛋白浓度，需要减去提取液本身的蛋白浓度。

实验实例：

1. 取0.1044g小鼠脑组织，加入1mL提取液，进行匀浆、离心、取上清，之后按照测定步骤操作，用96孔UV板测得计算ΔA=（A1测定-A2测定）-（A1空白-A2空白）=（0.828-0.162）-（0.788-0.774）=0.652，按样本质量计算酶活得：

ACC酶活（U/g 质量）=535.9×∆A÷W=3346.8 U/g 质量。

2. 取0.1041g向日葵叶片组织，加入1mL提取液，进行匀浆、离心、取上清，之后按照测定步骤操作，用96孔UV板测得计算ΔA=（A1测定-A2测定）-（A1空白-A2空白）=（0.841-0.811）-（0.788-0.774）=0.016，按样本质量计算酶活得：

ACC酶活（U/g 质量）=535.9×∆A÷W=82.37 U/g 质量。

3. 取3×10⁶个Raw细胞，加入1mL提取液，进行匀浆、离心、取上清，之后按照测定步骤操作，用96孔UV板测得计算ΔA=（A1测定-A2测定）-（A1空白-A2空白）=（0.655-0.557）-（0.788-0.774）=0.084，按细胞数量计算酶活得：

ACC酶活（U/10⁶ cell）=535.9×∆A÷N=15.01 U/10⁶ cell。

4. 取30μL兔血清，按照测定步骤操作，用96孔UV板测得计算ΔA=（A1测定-A2测定）-（A1空白-A2空白）=（0.846-0.810）-（0.788-0.774）=0.022，按样本血清（浆）体积计算酶活得：

ACC酶活（U/mL）=[∆A×V反总÷（ɛ×d）×10⁹]÷V样÷T=178.63∆×A=3.93U/mL

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