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产品名称:

谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)测试盒

产品品牌: 索莱宝 价格: 1200
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-10
谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)测试盒
谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应,生成氧化型谷胱甘肽GSSG,从而保护生物膜免受ROS的损害

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC1190
规格50管/24样供货周期现货
主要用途谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)测试盒

产品名称谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性检测试剂盒

产品英文名Glutathione Peroxidase (GPX) Assay Kit

产品货号:BC1190              产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格:50管/48样             产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            参考价格:1600
库存状态:现货                          
关键字:谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒|活性检测试剂盒|GPX含量检测|试剂盒|
简要介绍:
氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式,又称为二硫代谷胱甘肽,是两分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH,因此机体中大多数是以还原型形式存在。测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。本试剂盒利用谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-(2-硝基ben甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基ben甲酸,2-硝基-5-巯基ben甲酸在波长412nm处具有大光吸收的特点,通过2-乙烯吡dian抑制样品中原有的还原型谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽还原酶将GSSG还原为GSH,借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。
 

产品详细描述
产品内容
试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶4℃保存。
试剂三:液体×1支,-20℃保存。
 试剂四:液体×1瓶,4℃保存。
    工作液配制:临用前,试剂二中加入试剂一40 mL,充分震荡溶解后加入全部试剂三,混匀。(当天用完)
产品说明
谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应,生成氧化型谷胱甘肽GSSG,从而保护生物膜免受ROS的损害,维持细胞的正常功能;而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。
GSH-Px催化H2O2氧化GSH,产生GSSG;谷胱甘肽还原酶(GR)催化NADPH还原GSSG,再生GSH,同时NADPH氧化生成NADP+NADPH340 nm有特征吸收峰,而NADP+没有;可以通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。
自备仪器和用品:
紫外-可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:

  1. 组织:按照组织质量(g试剂一体积(mL)15~10 的比例(建议称取0.1g 组织,加入1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。10000rpm4离心10min,取上清置冰上待测(如上清不清澈,再离心3min)
  2. 细菌、真菌:按照细胞数量104个:试剂一体积(ml500~1000:1 的比例建议500 万细胞加入1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3 s,间隔7s,总时间3min)然后10000rpm4,离心10min,取上清置冰上待测(如上清不清澈,再离心3min)
  3. 血清等液体:直接测定。

二、GSH-Px测定操作:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
2. 混合试剂在25℃或者37℃(哺乳动物)水浴中预热30min以上。
3. 空白管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸馏水、800μL预热的工作液,100μL试剂四,迅速混匀后于340nm处测定10 s处的吸光值,37℃水浴3min后迅速拿出测量吸光度,分别记为A1A2。计算A=A1-A2。(空白管只需做1~2个)
4. 测定管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、800μL预热的工作液,100μL试剂四,迅速混匀后于340nm处测定10 s处的吸光值,37℃水浴3min后迅速拿出测量吸光度,分别记为A1A2。计算A=A1-A2
三、GSH-Px活性计算:
1)按蛋白浓度计算
GSH-Px活力单位定义:一定温度下,每mg蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol NADPH氧化定义为一个酶活力单位。
GSH-Px (U/mg prot) =[ (A测定管-A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷[Cpr×V]÷T
             =536×(A测定管-A空白管)÷Cpr
2)按样本鲜重计算
GSH-Px活力单位定义:一定温度中,每g样品在反应体系中每分钟催化1μmol NADPH氧化定义为一个酶活力单位。
GSH-Px (U/g 鲜重)=[ (A测定管-A空白管)÷(ε×d)×V反总×106] ÷(V÷V样总×W)÷T
            =536×(A测定管-A空白管)÷W
(3) 按细胞数量计算
GSH-Px 活力单位定义:一定温度中,每104个细胞每分钟催化1μmol NADPH 氧化定义为一个酶活力单位
GSH-Px (U/104 cell)=[(A 测定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷(细胞数量×V ÷V样总)÷T
=536×(A 测定管-A 空白管细胞数量
(4) 按液体体积计算
GSH-Px 活力单位定义:一定温度中,每毫升液体每分钟催化1μmol NADPH 氧化定义为一个酶活力单位
GSH-Px (U/ml)=[(A 测定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷V ÷T
=536×(A 测定管-A 空白管)
A空白管=A1-A2A测定管=A1-A2
εNADPH摩尔消光系数6.22×103L/mol/cmd:比色皿光径,1 cmV反总:反应体系总体积,0.001 L1061 mol=1×106μmolCpr:上清液蛋白浓度(mg/mL);V样:加入反应体系中上清液体积,100μL =0.1 mLT:反应时间,3 minW :样品质量,g
注意事项:
1)样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力;
2)混合试剂和底物液须临用前配制,配完后置于冰上;
3)测定过程操作须迅速;
4)细胞中GSH-Px活性测定时,细胞数目须在300-500万之间,细胞中GSH-Px的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞。

相关文献:
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谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)测试盒

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