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产品名称:

谷氨酸脱氢酶(GDH)测试盒 氮代谢

产品品牌: 索莱宝 价格: 650
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-11
谷氨酸脱氢酶(GDH)测试盒 氮代谢 可见分光光度法由北京索莱宝提供,北京索莱宝提供谷氨酸脱氢酶(GDH)试剂盒测定意义,测定原理,使用方式,价格,英文名称等信息。更多谷氨酸脱氢酶(GDH)试剂盒信息请客服咨询

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC1460
规格50管/48样供货周期现货
主要用途测定谷氨酸脱氢酶活性应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

谷氨酸脱氢酶(GDH)测试盒 氮代谢 可见分光光度法

货号 :BC1460
规格 :50 管/48 样


产品内容:
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 支,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 支,4℃保存;
试剂四:粉剂×1 支,-20℃保存。


产品简介:
GDH 和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同参与谷氨酸的合成,在氨同化和转化成有机氮化合物的
代谢中起重要作用。GDH 催化 NH4 + 、α-酮戊二酸和 NADH,生成谷氨酸和 NAD + ,引起 340nm 吸光度下降。通过测定 340nm 吸光度的下降速率,计算 GDH 活性。
试验中所需的仪器和试剂:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。


操作步骤:
一、 粗酶液提取:
1. 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10 4 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3. 血清(浆)样品:直接检测。
二、 测定步骤 :
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长 340nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
(1)工作液的配制:临用前将试剂二、三、四转移到试剂一中混合溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 5min;现配现用;
(2)取 0.05mL 样本和 1mL 工作液于 1mL 比色皿中,混匀,加工作液的同时开始计时,在 340 nm波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒时的吸光度 A2,计算 ΔA=A1-A2。
GDH  活性计算 :
1、血清(浆)中 GDH 活力的计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9 ]÷V 样÷T=675×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 GDH 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9 ]÷(V 样×Cpr) ÷T=675×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9 ]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=675×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9 ]÷(V 样÷V 样总×500) ÷T=1.35×ΔAV 反总:反应体系总体积,1.05×10 -3 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×10 3 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

相关文献:

 《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影响因子:4.183 PMID:30558146

 

谷氨酸脱氢酶(GDH)测试盒 氮代谢 可见分光光度法

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