羧酸酯酶(CarE)活性检测试剂盒

羧酸酯酶（CarE）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0840
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前取1瓶先加入1.25mL无水乙醇，震荡使其大部分溶解，再加入8.75mL试剂三，震荡至充分溶解，用不完的试剂2-8℃保存一周。

2. 试剂二：临用前取1瓶试剂二中加入18mL试剂三，震荡使其充分溶解。本试剂溶解后为淡黄色，且在常温下不稳定，建议根据样本量取适当配好的试剂二置于冰上待用，剩余试剂分装后置于-20℃保存一周，禁止反复冻融。

产品说明：
哺乳动物CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于丝*酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰*碱及其类似物。CarE参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE活
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固蓝显色；在450nm光吸收增加速率，计算CarE活性。


注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、研钵/匀浆器、超声破碎仪，蒸馏水和无水乙醇。
操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：

1. 试剂二为-20℃储存试剂，在常温下不稳定，一般常温放置2-3小时后即可明显发现液体由浅黄色变为浅褐色

（液体变褐色视为变质，不可用）。建议试验前根据样本量计算所需试剂二的用量，在试剂二溶解后，留取所需用量置于冰上待用，剩余试剂可分装后-20℃储存。

1. 动物组织样本一般稀释8倍或更大稀释倍数后进行操作测定。

2. 当吸光值大于1时，建议将样本用蒸馏水稀释后测量。计算公式注意乘以稀释倍数。

3. 建议反应时保持37℃的环境，且逐一比色。

实验实例：

1. 取0.1g小鼠肝脏加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清用蒸馏水稀释32倍后按照测定步骤操作，用玻璃比色皿测得计算ΔA空白管=A2空-A1空=0.202-0.140=0.062，ΔA测定管=A2测-A1测=0.959-0.185=0.774，按样本质量计算酶活得：

CarE酶活(U/g质量)=4×(ΔA测定管-ΔA空白管)÷W×F=4×(0.774-0.062)÷0.1×32=911.36 U/g 质量。

1. 取0.1g小鼠肾脏加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清用蒸馏水稀释8倍后按照测定步骤操作，用玻璃比色皿测得计算ΔA空白管=A2空-A1空=0.202-0.140=0.062，ΔA测定管=A2测-A1测=0.586-0.231=0.355，按样本质量计算酶活得：

CarE酶活(U/g质量)= 4×(ΔA测定管-ΔA空白管)÷W×F=4×(0.355-0.062)÷0.1×8=93.76 U/g 质量。

1. 取马血清用蒸馏水稀释8倍后按照测定步骤操作，用玻璃比色皿测得计算ΔA空白管=A2空-A1空=0.202-0.140=0.062，ΔA测定管=A2测-A1测=0.621-0.130=0.491，计算酶活得：

CarE酶活(U/mL)=4×(ΔA测定管-ΔA空白管) ×F=4×(0.491-0.062)×8=13.728 U/mL 质量。
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