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  • 线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性测试盒
产品名称:

线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性测试盒

产品品牌: 索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-09
线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性测试盒
线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C 氧化酶,也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分,负责催化还原型细胞色素C 的氧化,并Z终把电子传递给氧,生成水。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0940
规格25管/24样供货周期现货
主要用途线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性测试盒

产品名称:线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性测试盒

产品英文名:  Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅣActivity Assay Kit

产品货号:BC0940                产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格:50管/48样           产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            参考价格:1900
库存状态:现货                          
关键字:      |  线粒体呼吸链复合体|线粒体呼吸链|试剂盒

简要介绍:
线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C 氧化酶,也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分,负责催化还原型细胞色素C 的氧化,并终把电子传递给氧,生成水。
    还原型细胞色素C 在550nm 有特征光吸收,线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C 生成氧化型细胞色素C,因此550nm 光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。


产品详细描述
产品内容:
提取液:液体80mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体21mL×2瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×2支,-20℃保存;
试剂三:粉剂×2支,4℃保存;
工作液的配制:临用前取试剂一、试剂二、试剂三各一支,将试剂二和试剂三依次转移到试剂一中混合溶解。
 
产品说明
线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C氧化酶,也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分,负责催化还原型细胞色素C的氧化,并终把电子传递给氧生成水。还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收,线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C 生成氧化型细胞色素C,因此550nm光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:
一、复合体Ⅳ的提取:   

  • 称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1.0 mL提取液,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
  • 4 ℃ 600 g离心10min。
  • 将上清液移另一离心管中,4 ℃ 11000 g离心15min。
  • 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的复合体(此步可选做,可以判断线粒体提取效果)。
  • 在沉淀中加入400uL提取液,超声波破碎(功率20%,超声5秒,间隔10秒,重复15次),用于复合体酶活性测定,并且用于蛋白含量测定。

二、测定步骤:

  1. 可见分光光度计预热30min 以上,调节波长550nm,蒸馏水调零。
  2. 样本测定
  3. 将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育15min;用不完的试剂4℃可保存一周;
  4. 在1mL玻璃比色皿中分别加入
试剂名称测定管空白
样品(μL)40-
蒸馏水(μL)-40
工作液(μL)800800

立即混匀,分别记录测定管和空白管550nm处初始吸光值A1和1min后的吸光值A2,测定管的记为A1测定管,A2测定管,空白管的记为A1空白管,A2空白管。计算ΔA1=A1测定管-A2测定管,ΔA2=A1空白管-A2空白管,ΔA=ΔA1-ΔA2。
三、复合体Ⅳ活力单位的计算:
单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅳ活力(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1099×ΔA÷Cpr
V 反总:反应体系总体积,8.4×10-4 L;ε:细胞色素C摩尔消光系数,1.91×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.04 mL; T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL,需自行测定,建议使用本公司BCA蛋白浓度测定试剂盒
注意事项:

  1. 为保证实验结果的准确性,需先取1-2个样做预实验,如果测定的吸光值过高(高于1),可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。若ΔA大于0.4,需将样本稀释适当倍数(计算公式中乘以相应稀释倍数),使A1-A2 小于0.2,可提高检测灵敏度;若ΔA偏小,则可以通过增加加入的样品体积来提高灵敏度。
  2. 由于提取液中含有蛋白,所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量(单独测量)
  3. 本试剂盒试剂足够完成50管反应。
  4. 附:使用样本重量计算公式:(检测样本数为50T/24S)

A、上清中复合体Ⅳ活力的计算
按样本鲜重计算:
单位定义:每g组织在反应体系中每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅳ活力(U/g)=[ΔA1×V 反总÷(ε×d)×109(W÷V提取×V样)÷T=1099×ΔA1÷W
ΔA1:上清测定值;V 反总:反应体系总体积,8.4×10-4 L;ε:细胞色素C摩尔消光系数,1.91×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.04 mL;V提取:加入提取液体积,1.0mL。 w:样本重量,g。T:反应时间,1 min;
B、沉淀中复合体Ⅳ活力的计算
按样本鲜重计算:
单位定义:每g组织在反应体系中每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅳ活力(U/g)=[ΔA2×V 反总÷(ε×d)×109(W÷V提取×V样)÷T=440×ΔA2÷W
ΔA2:沉淀测定值;V 反总:反应体系总体积,8.4×10-4 L;ε:细胞色素C摩尔消光系数,1.91×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.04 mL;V提取:加入提取液体积,0.4mL。 w:样本重量,g。T:反应时间,1 min;
C、样本复合体Ⅳ总活力的计算
样本复合体总活力即为上清中复合体活力与沉淀中复合体活力之和。
按样本鲜重计算:
复合体Ⅳ(U/g)=1099×ΔA1÷W+440×ΔA2÷W

相关文献:
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