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产品名称:

线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性测试盒

产品品牌: 索莱宝 价格: 1760
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-11
线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性测试盒
线粒体复合体Ⅴ又称F1F0-ATP合酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成,也可逆过程水解ATP。此外,复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC1440
规格25管/12样供货周期现货
主要用途线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性测试盒

产品名称:线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性检测试剂盒

产品英文名:  Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅤActivity Assay Kit

产品货号:BC1440               产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格:50管/24样           产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            参考价格:2600
库存状态:现货                          
关键字:       线粒体呼吸链复合体检测试剂盒|  线粒体呼吸链复合体|线粒体呼吸链|试剂盒

简要介绍:
线粒体复合体Ⅴ又称F1F0-ATP合酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成,也可逆过程水解ATP。此外,复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。
    复合体Ⅴ水解ATP 产生ADP 和Pi,通过测定Pi 增加速率来测定复合体Ⅴ活性。



产品详细描述
产品内容:
提取液:液体15mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存;
试剂二: 粉剂×1支,-20℃保存;临用前每支加入1.11mL双蒸水,充分溶解备用,分装后-20℃保存,避免反复冻融;
试剂三:液体6mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入3mL双蒸水,充分混匀;
试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入10mL双蒸水,充分混匀;
试剂六:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入10mL双蒸水,充分混匀;
试剂七:液体10mL×1 瓶,室温保存。
标准品:液体1mL×1 支,4℃保存。10μmol/mL磷标准液。临用前用蒸馏水稀释40倍即0.25μmol/mL 磷标准液。
定磷试剂的配制:按H2O:试剂五:试剂六:试剂七=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷试剂应为浅黄色。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染(请根据需要,用多少配多少)。
注意:配试剂用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器,或者一次性塑料器皿,以避免磷污染。
 
产品说明
线粒体复合体Ⅴ又称F1F0-ATP合酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成,也可逆过程水解ATP。此外,复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。
复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi,通过测定Pi增加速率来测定复合体Ⅴ活性。
试验中所需的仪器和试剂:
台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、复合体Ⅴ的提取:   

  • 称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1.0 mL提取液,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
  • 4 ℃ 600 g离心10min。
  • 将上清液移另一离心管中,4 ℃ 11000 g离心15min。
  • 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的复合体(此步可选做,可以判断线粒体提取效果)。
  • 在沉淀中加入400uL提取液,超声波破碎(功率20%,超声5秒,间隔10秒,重复15次),用于复合体酶活性测定,并且用于蛋白含量测定。

二、测定步骤:

  1. 可见分光光度计预热30min以上,调节波长660nm,蒸馏水调零。
  2. 操作表:

(1)酶促反应

试剂名称(μL)对照管测定管标准管
试剂二4040-
试剂三160160-
 样品 -200-
混匀, 37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确水浴30min
试剂四8080-
样品200 -
混匀,8000rpm,室温离心10min,取上清液

(2)定磷

上清液200200200
定磷试剂100010001000

混匀,40℃水浴10min,尽快在660nm测定吸光值,分别记为A测定管、A对照管、A标准管,计算ΔA=A测定管-A对照管。

三、复合体Ⅴ活力单位的计算:
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性(U/mg prot)=ΔA÷A标准×C标准×V酶促×1000÷(Cpr×V样品)÷T
=20×ΔA÷A标准÷Cpr。
C标准液:标准溶液浓度,0.25μmol/mL; 1000:1μmol=1000nmol;Cpr:样品蛋白浓度,mg/mL,需自行测定,推荐我公司BCA蛋白浓度测定试剂盒;V样品:样品体积,0.2mL;V酶促,酶促反应总体积,0.48mL;T:反应时间,30min。
注意事项:

  1. 为保证实验结果的准确性,需先取1-2个样做预实验,如果测定的吸光值过高(高于1),可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。若ΔA大于0.4,需将样本稀释适当倍数(计算公式中乘以相应稀释倍数),使A1-A2 小于0.2,可提高检测灵敏度;若ΔA偏小,则可以通过增加加入的样品体积来提高灵敏度。
  2. 由于提取液中含有蛋白,所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量(单独测量)
  3. 本试剂盒试剂足够完成50管反应。
  4. 附:使用样本重量计算公式:(检测样本数为50T/24S)

A、上清中复合体Ⅳ活力的计算
按样本鲜重计算:
单位定义:每g组织在反应体系中每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅳ活力(U/g)=[ΔA1×V 反总÷(ε×d)×109(W÷V提取×V样)÷T=1099×ΔA1÷W
ΔA1:上清测定值;V 反总:反应体系总体积,8.4×10-4 L;ε:细胞色素C摩尔消光系数,1.91×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.04 mL;V提取:加入提取液体积,1.0mL。 w:样本重量,g。T:反应时间,1 min;
B、沉淀中复合体Ⅳ活力的计算
按样本鲜重计算:
单位定义:每g组织在反应体系中每分钟催化降解1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅳ活力(U/g)=[ΔA2×V 反总÷(ε×d)×109(W÷V提取×V样)÷T=440×ΔA2÷W
ΔA2:沉淀测定值;V 反总:反应体系总体积,8.4×10-4 L;ε:细胞色素C摩尔消光系数,1.91×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.04 mL;V提取:加入提取液体积,0.4mL。 w:样本重量,g。T:反应时间,1 min;
C、样本复合体Ⅳ总活力的计算
样本复合体总活力即为上清中复合体活力与沉淀中复合体活力之和。
按样本鲜重计算:
复合体Ⅳ(U/g)=1099×ΔA1÷W+440×ΔA2÷W

相关文献:
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影响因子:4.259 PMID:29503638
《Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke -induced airway epithelial cell injury model》 作者:Muyun Wang,Yanbei Zhang,Mengmeng Xu,HaiZhang,Yuqing Chen,Kian Fan Chung,Ian M.Adcock,Feng Li 期刊:Free Radic. Biol. Med. 影响因子:5.657 PMID:30639616


 

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