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  • 丙酮酸脱氢酶(PDH)检测试剂盒 三羧酸循环
产品名称:

丙酮酸脱氢酶(PDH)检测试剂盒 三羧酸循环

产品品牌: 索莱宝 价格: 700
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-06
丙酮酸脱氢酶(PDH)检测试剂盒 三羧酸循环
丙酮酸脱氢酶(PDH)检测试剂盒由北京索莱宝提供,北京索莱宝提供丙酮酸脱氢酶(PDH)试剂盒测定意义,测定原理,使用方式,价格,英文名称等信息。更多丙酮酸脱氢酶(PDH)试剂盒信息请客服咨询

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0380
规格50管/48样供货周期现货
主要用途丙酮酸脱氢酶酶活测定应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

丙酮酸脱氢酶(PDH)检测试剂盒 三羧酸循环

 

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

货号: BC0380

规格: 50T/48S

 

产品内容:

试剂一:液体60mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:液体1mL×1 支,-20℃避光保存;

试剂三:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;

试剂四:粉剂×1 支,4℃保存;

试剂五:粉剂×1 支,-20℃保存;

试剂六:粉剂×1 支,4℃保存;

试剂七:粉剂×1 支,4℃保存;

 

工作液的配制:临用前把试剂四、五、六、七转移到试剂三中混合溶解待用;用不完的试剂 4℃保存一周。

 

产品说明:

     PDH(EC 4.1.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶,催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循环连接起来。PDH催化丙酮酸脱氢,同时还原2,6-二氯酚靛酚(2,6-DCPIP),从而导致605nm光吸收的减少。

 

需自备的仪器和用品:

     可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、样本的处理

    称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入1mL 试剂一和 10μL试剂二,用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨,4 ℃ 11000 g离心10min,取上清,置冰上待测。

 

二、测定步骤

     1、分光光度计预热 30min以上,调节波长 605nm,蒸馏水调零。

     2、每个样本需要900μL工作液,按样本数加一取出一定量的工作液于37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)中孵育5min。

     3、空白管:在1mL比色皿中加入900 µL工作液和50µL水,混匀,立即记录605nm处初始吸光值A1和1min后的吸光值A2,计算 ΔA空白=A1-A2。

     4、测定管:在1mL 比色皿中加入900 µL工作液和50µL样本,混匀,立即记录 605nm 处初始吸光值A3和1min后的吸光值A4,计算ΔA测定=A3-A4。

 

三、PDH 活性计算

    (1) 按样本蛋白浓度计算

     单位的定义:每mg 组织蛋白每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

PDH活性(U /mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T

=904.762×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr

    (2) 按样本鲜重计算

     单位的定义:每g组织每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

PDH活性(U/g鲜重)=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)÷T

=913.81×(ΔA测定-ΔA空白)÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算

     单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

     PDH 活性(U/104 cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=1.828×(ΔA测定-ΔA空白)

     V 反总:反应体系总体积,9.5×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

 

注意事项:

1、测定过程中所有样本在冰上放置,以免变性和失活。

2、测定管的ΔA值在0.01-0.25之间,若测定管的ΔA值大于0.25,需将样本进行稀释。 

 相关文献:

 《Engineering Corynebacterium glutamicum for high-titer biosynthesis of hyaluronic acid.》 作者:Fangyu Cheng,Huimin Yu,Gregory Stephanopoulos 期刊:Metab. Eng. 影响因子:7.808 PMID:31301358

丙酮酸脱氢酶(PDH)检测试剂盒 三羧酸循环订购说明:

1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。 
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