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产品名称:

线粒体异柠檬酸脱氢酶测试盒 三羧酸循环

产品品牌: 索莱宝 价格: 850
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-13
线粒体异柠檬酸脱氢酶测试盒 三羧酸循环
ICDHm(EC 1.1.1.41)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,在三羧酸循中催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸,同时将NAD+ 还原为NADH,是三羧酸循环的限速酶之一,其催化的反应是细胞NADH 主要来源之一。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC2160
规格50管/24样供货周期现货
主要用途线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)活性检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

线粒体异柠檬酸脱氢酶测试盒 三羧酸循环

线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)活性测定试剂盒说明书
分光光度法
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
货号:BC2160
规格:50 管/48 样

产品组成:
试剂一:50mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂二:10mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂三:1mL×1 支,-20℃保存;
试剂四:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂五:粉剂×1 支,4℃保存;
试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存;
试剂七:粉剂×1 支,-20℃保存; 临用前加入 3mL 蒸馏水充分混匀待用,现配现用。
工作液的配制:临用前把试剂五、试剂六转移到试剂四中混合溶解待用;用不完的试剂 4℃保存一周;

产品说明:
ICDHm(EC 1.1.1.41)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,在三羧酸循中催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸,同时将 NAD+ 还原为 NADH,是三羧酸循环的限速酶之一,其催化的反应是细胞 NADH 主要来源之一。ICDHm 催化 NAD+ 还原生成 NADH,导致 340nm 处光吸收上升。

需自备的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤:
一、 样本的前处理:
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
1、 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细菌或细胞,加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 将匀浆 600g,4℃离心 5min。
3、 弃沉淀,将上清液移另一离心管中,11000g,4℃离心 10min。
4、 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的 ICDHm(此步可选做)。
5、 在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),用于线粒体 ICDHm 活性测定。

二、 测定步骤
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长 340nm 处,蒸馏水调零。
2、 工作液于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)孵育 5min。
3、在 1mL 石英比色皿中依次加入 60μL 试剂七、80μL 样本和 1mL 工作液,混匀,立即记录 340nm处 20s 时的吸光值 A1 和 2min20s 时的吸光值 A2,计算ΔA=A2-A1。

三、 ICDHm 活性计算
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活性单位。
ICDHm 活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样) ÷T=1145×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活性单位。
ICDHm(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=231.3×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活性单位。
ICDHm 活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.463×ΔA

V 反总:反应体系总体积,1.14×10-3 L;
ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cm;
d:比色皿光径,1cm;
V 样:加入样本体积,0.08 mL;
V 样总:加入提取液体积,0.202 mL;
T:反应时间,2min;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
W:样本质量,g;
500:细菌或细胞总数,500 万

相关文献:

《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影响因子:3.571 PMID:29845188
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影响因子:5.657 PMID:31022448  

线粒体异柠檬酸脱氢酶测试盒 三羧酸循环

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