二氢黄酮醇还原酶活性检测试剂盒 抗氧

二氢黄酮醇还原酶（DFR）活性检测试剂盒说明书

紫外分光光度法

货号：BC5780

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 提取液：临用前用蒸馏水稀释10倍后使用，稀释后的提取液可2-8℃保存8周。

2、 混合液：临用前将试剂一，试剂二和试剂三共同溶于1mL无水乙醇中充分溶解，溶解后的试剂2-8℃可以保存4周。

3、 工作液：临用前根据样本量按照混合液：蒸馏水=10μL:990μL（1000μL，10T）的比例配制，现用现配。

4、 试剂五：试剂放于瓶内玻璃管内。临用前加入6.25mL蒸馏水中充分溶解，溶解后的试剂-20℃分装保存可以保存4周，避免反复冻融。

产品说明：

二氢黄酮醇还原酶，即二氢黄酮醇-4-还原酶（Dihydroflavonol-4-reductase, DFR）是植物花青素生物合成途径的关键酶，可催化二氢黄酮醇生成不同的花青素前体，因此DFR决定着植物中花青素的种类和含量，从而影响植物组织或器官的颜色。

DFR、NADPH和二氢黄酮醇反应生成花青素前体。NADPH在340nm处有最大吸收峰。通过检测NADPH在340nm下的变化速率，即可得到DFR活性的大小。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、无水乙醇（AR）、硫酸铵（AR）、冰和蒸馏水。

操作步骤：具体的操作步骤请见“产品资料"文件

注意事项：

1、 如果∆A测定＞1或者A1测定＜A1空白，可以用提取液（稀释）将样本（前处理中的沉淀溶解液）进行稀释或者缩短30℃反应时间；∆A测定小于0.01，可以加大样本量或者延长30℃反应时间。最终计算时同步修改计算公式。

实验实例：

1、 称取0.2249g芒果，加入提取液进行冰浴匀浆，按照测定步骤操作，用1mL石英比色皿测得计算∆A测定=1.163- 1.045=0.118，∆A空白=1.099-1.015=0.084，∆A =∆A测定-∆A空白=0.034，带入公式计算：

DFR活性(U/g 质量)=23.58×ΔA÷W =3.565 U/g 质量

参考文献：

[1] Hayashi M, Takahashi H, Tamura K, et al. Enhanced dihydroflavonol-4-reductase activity and NAD homeostasis leading to cell death tolerance in transgenic rice[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2005, 102(19):p.7020-7025.

[2] Petit P, Granier T, Béatrice Langlois d'Estaintot, et al. Crystal Structure of Grape Dihydroflavonol 4-Reductase, a Key Enzyme in Flavonoid Biosynthesis[J]. Journal of Molecular Biology, 2007, 368(5):1345-1357.

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