土壤中性木聚糖活性检测试剂盒 微量法

土壤中性木聚糖酶（S-NEX）活性检测试剂盒说明书

微量法

货号：BC5735

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 标准品：10mg木糖。临用前加入667μL蒸馏水配制成100μmol/mL的木糖标准液，2-8℃保存8周。

产品说明：

土壤中性木聚糖酶（Soil neutral xylanase, S-NEX），又称为土壤中性半纤维素酶，主要分离自最适生长pH为6-8的微生物。

在中性环境中，S-NEX催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算S-NEX活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低温离心机、水浴锅、研钵、30~50目筛、蒸馏水。

操作步骤：具体的操作步骤请见“产品资料"文件

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、 标准品的稀释：临用前将标准品用蒸馏水稀释为2、1.5、1.2、1、0.8、0.4、0.2μmol/mL的标准溶液待测。

3、 标准品稀释表：

备注：实验中每管需要150μL。

4、 样本测定（在EP管中加入下列试剂）

注意事项：

1. 若样本ΔA<0.01，可适当增大样本量或者延长50℃反应时间后测定；若样本ΔA>1.5或者A测定＞1.5时，可用蒸馏水稀释上清液后测定，注意同步修改计算公式中的稀释倍数。

2. 建议使用螺旋管，防止沸水浴过程中盖子爆开，改变反应体系。

实验实例：

1、 取0.05g野蘑菇土，按操作表进行第一步反应2h后，取上清液用蒸馏水稀释2倍后按照测定步骤操作，用96孔板测得ΔA测定=A测定- A对照=0.891-0.200=0.691，带入标曲y=0.7418x-0.2302（R²=0.9992），计算x=1.242，按样本质量计算S-NEX活性得：

S-NEX活性（U/g 土样）= 0.15× x÷W×F =7.452 U/g 土样。

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