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专注于生物学试剂及试剂盒领域
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产品型号：BC5360-50T/48S
更新时间：2024-04-19
厂商性质：生产厂家
访 问 量 ：1552
010-50973130
产品分类
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唾液酸（SA）含量检测试剂盒
可见分光光度法
货号：BC5360
规格：50T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色液 | 液体80 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体0.5 mL×1支 | -20℃保存 |
溶液配制：
标准品：4mmol/L唾液酸标准液。
产品说明：
唾液酸（Sialic acid，SA），又称N-乙酰神经氨酸，是细胞膜上糖蛋白和糖脂的重要成分，其广泛的存在于生物体中，参与细胞表面的多种生理功能。
唾液酸在氧化剂存在的情况下与5-甲基间*二酚形成紫红色络合物，其在560nm处有最大吸收峰，通过测定产物在560nm的吸光值，可以计算出唾液酸含量。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者
增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 组织：按照样本质量（g）：提取液体积（mL）为1:5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆；3000rpm 4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000:1 的比例（建议500万细菌或细胞加入 1mL 提取液）加入提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声 3s，间隔 7s，总时间3min），3000rpm 4℃离心10min，取上清置冰上待测。
3. 乳液样本：10000g 4℃离心10min后，去除上层的油脂后使用。
4. 其他液体样本：直接测定（如有浑浊，可离心后使用）。
二、测定步骤
1、可见分光光度计预热30min以上，调节波长至560nm，蒸馏水调零。
2、在EP管中按下表步骤加样：
试剂名称(μL) | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 40 | - | - |
标准品 | - | 40 | - |
蒸馏水 | - | - | 40 |
显色液 | 1200 | 1200 | 1200 |
100℃沸水浴15min，冷却至常温，8000rpm，常温离心10min（如果待测液依旧浑浊，可以加大离心转速）吸取1mL上清，于560nm处测定吸光值，分别记为A测定、A标准、A空白。分别计算ΔA测定=A测定-A空白，ΔA标准=A标准-A空白（标准管和空白管只需做1-2次）。
二、唾液酸含量的计算
（1）按样本蛋白质浓度计算（蛋白浓度需自行测定）：
唾液酸含量（mmol/g prot）= ΔA测定×C标÷ΔA标准×V样总÷（Cpr×V样总×1000）
= 0.004×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
（2）按样本质量计算：
唾液酸含量（mmol/g 质量）= ΔA测定×C标÷ΔA标准×V样总÷W=0.004×ΔA测定÷ΔA标准÷W
（3）按细菌/细胞数量计算：
唾液酸含量（mmol/104 cell）= ΔA测定×C标÷ΔA标准×V样总÷N= 0.004×ΔA测定÷ΔA标准÷N
（4）按照液体样本体积计算：
唾液酸含量（mmol/L）= ΔA测定×C标÷ΔA标准=4×ΔA测定÷ΔA标准
V样总：加入提取液之后的样本体积，0.001L；C标：标准品的浓度，4mmol/L；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：细胞数量，万个；1000：换算系数，1L=1000mL。
注意事项：
1、 100℃沸水浴温度比较高，建议使用封口膜为离心管缠口，或使用螺旋盖的离心管。
2、 ΔA测定的数值范围在0.005-0.6之间。如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以用蒸馏水稀释样本后再次测定，如果测定吸光值小于线性范围吸光值，需要增加样本量后再次测定，注意同步计算公式。
实验实例：
1. 吸取40μL牛血清，按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得A测定 = 0.291，A空白 = 0.002，∆A测定= 0.289，A标准 = 0.415，∆A标准 = 0.413。按液体样本体积计算唾液酸含量得：
唾液酸含量（mmol/L）= 4×ΔA测定÷ΔA标准=2.799 mmol/L。
2. 吸取40μL血浆，按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得A测定 = 0.227，A空白 = 0.002，∆A测定= 0.225，A标准 = 0.415，∆A标准 = 0.413。按液体样本体积计算唾液酸含量得：
唾液酸含量（mmol/L）= 4×ΔA测定÷ΔA标准=2.179 mmol/L。
3. 称取0.123g小鼠肝脏，加入1mL提取液，冰浴匀浆，离心后取上清，按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得A测定 = 0.07，A空白 = 0.002，∆A测定 = 0.068，A标准 = 0.415，∆A标准 = 0.413。按样本质量计算唾液酸含量得：
唾液酸含量（mmol/g 质量）= 0.004×ΔA测定÷ΔA标准÷W = 0.0054 mmol /g 质量。
参考文献：
[1] Yongpoovorawan, S. O. C. , Role of serum total sialic acid in differentiating cholangiocarcinoma from hepatocellular carcinoma[J]. World Journal of Gastroenterology,2003,9(10):2178-2181.
[2] Lu yiqin , Glycophorin variants and contents of sialic acid and total sulfhydryl groups on erythrocyte membranes of residents in a malaria hyperendemic area[J]. Chinese Medical Journal,1998,111(7):606-609.
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