植物根系活力检测试剂盒 微量法

植物根系活力检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作

货号：BC529

规格：100T/96S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂三：临用前加入18 mL蒸馏水，充分混匀，现用现配。未用完的试剂2-8℃可以保存4周。

2、 标准品：0.4 mg/mL α-标准品。

产品说明：

根系是植物吸收水分和矿质营养的主要器官，同时又是植物体中重要物质如氨基酸、激素等物质合成、同化、转化的器官，因此根的生长情况和活动能力直接影响植物个体的生长情况、营养水平和产量水平等，根系活力具有重要的实际意义。

植物根系能氧化吸附在根表面的α-，生成红色的α-羟基-1-，沉淀于有氧化力的根的表面，使这部分染成红色。α-在酸性条件下于对氨基 苯磺酸钠和亚硝酸盐作用生成红色的偶氮染料。根系活力可以通过α-减少量来表示。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、滤纸、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

样本的制备：将根部组织洗净，去除根上的泥土，轻轻擦干，不要过分挤压破坏根系细胞。称取0.2g于5mL EP 管中。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至520nm，可见分光光度计用蒸馏水调零。

2、 标准品的稀释：将0.4mg/mL α-标准品用试剂一稀释为0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625mg/mL的标准品。（0mg/mL记为标准空白管）

3、标准品稀释表：

备注：下述实验中每个标准管需75µL标准品（注意不要在此步骤直接检测标准品吸光值）。

4、在5mLEP管按下表步骤加样：

充分混匀，室温显色20min，取200μL于微量玻璃比色皿或96孔板中，测定在520nm处的吸光度，显色后需要在20min内完成检测。10min所对应的吸光值记作A1，3h10min所对应的吸光值记作A2。计算∆A测定=A1_测定-A2_测定，∆A空白=A1_空白-A2_空白，∆A =∆A测定-∆空白，∆A标=A标准-A标准空白管。（标准曲线和空白管只需做1-2次。）

三、根系活力计算

1. 标准曲线的绘制

根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标（y，ΔA标），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA（y，∆A）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。

2. 按照样本质量计算：以氧化的α-的量来表示根系活力

根系活力 [ μg / (g·h) ]=x×V试剂二×10³÷(W×T)=666.67×x÷W

10³：单位换算，1mg/mL=10³μg /mL；V试剂二：试剂二的体积，2mL；W：根系质量，g；T：反应时间，3h。

注意事项：

1、 在EP管/96孔板内加入试剂三、试剂四以及样本的顺序不可改变。

2、 如果∆A结果不在标准曲线范围内，可以减少样本质量（或者减少第一步反应时间）或者增加样本质量（或者增加第一步反应时间）。

3、 显色后需要在20min内完成检测。

实验实例：

1、 称取0.2081g豆芽的根部，洗净，擦干，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算∆A测定=A1_测定-A2_测定=1.449-1.328=0.121，∆A空白=A1_空白-A2_空白=1.555-1.487=0.068，∆A =∆A测定-∆A空白=0.121-0.068=0.053，标准曲线为y=3.2172x+0.0031，计算得x=0.016mg/mL,带入公式计算：

根系活力 [ μg / (g·h) ] = 666.67×x÷W=51.25 μg / (g·h)

2、 称取0.2031g景天的根部，洗净，擦干，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算∆A测定=A1_测定-A2_测定=1.517-1.424=0.093，∆A空白=A1_空白-A2_空白=1.555-1.487=0.068，∆A =∆A测定-∆A空白=0.093-0.068=0.025，标准曲线为y=3.2172x+0.0031，计算得x=0.007mg/mL,带入公式计算：

根系活力 [ μg / (g·h) ] = 666.67×x÷W=22.98 μg / (g·h)

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