H2S含量检测试剂盒 微量法

硫化氢（H₂S）含量检测试剂盒说明书

微量法

货号：BC2055

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

产品说明：

硫化氢（H₂S）是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的H₂S对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。

H₂S与N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在665nm处有最大吸收峰，通过测定其吸光值可计算H₂S含量。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 细菌或培养细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液一体积（mL）=500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔7s，总时间3min），12000g 4℃离心10min；然后取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，12000g 4℃离心10min，取上清置于冰上待测。

2. 组织样本：按照组织质量（g）：提取液一体积（mL）为1:5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液一），进行冰浴匀浆；12000g 4℃离心10min；然后取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，12000g 4℃离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清（浆）或其它液体样本：取100μL血清（浆）或其它液体样本加入1mL提取液一，12000g 4℃离心10min；然后取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，12000g 4℃离心10min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至665nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2. 加样表（按顺序在EP管或96孔板中加入下列试剂）

充分混匀，室温静置10min后，665nm处测定各管吸光值A，分别记为A测定、A空白，计算ΔA=A测定-A空白。空白管只需测1-2次。

三、H₂S含量计算

1、用微量石英比色皿测定的计算公式如下

以标准溶液浓度（nmol/mL）为x轴，以其对应的吸光值为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y = 0.0026x-0.0268，R² = 0.9973；将ΔA带入公式中得到x（nmol/mL）。

（1）按照样本质量计算

H₂S含量（nmol/g 质量）= x×（V上清+V提取液二）÷ （W×V上清÷V提取液一）=1.1875×x÷W

（2）按照样本蛋白浓度计算

H₂S含量（nmol/mg prot）= x×V样÷（V样×Cpr）= x÷Cpr

（3）按照细胞数量计算

H₂S含量（nmol/10⁴ cell）= x×（V上清+V提取液二）÷ （cells×V上清÷V提取液一）=1.1875×x÷cells

（4）按照液体体积计算

H₂S含量（nmol/mL）= x×（V上清+V提取液二）÷ [V液体×V上清÷（V提取液一+V液体）]=13.0625×x

V上清：提取时上清液的体积：0.8mL；V提取液一：加入提取液一的体积：1mL；V提取液二：加入提取液二的体积：0.15mL；V样本：反应液中加入样本的体积，0.05mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；cells：细胞数量，10⁴个；V液体：液体样本体积：0.1mL。

2、用96孔板测定的计算公式如下

以标准溶液浓度（nmol/mL）为x轴，以其对应的吸光值为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y = 0.0020x-0.0633，R² = 0.9951；将ΔA带入公式中得到x（nmol/mL）。

（1）按照样本质量计算

H₂S含量（nmol/g 质量）= x×（V上清+V提取液二）÷ （W×V上清÷V提取液一）=1.1875×x÷W

（2）按照样本蛋白浓度计算

H₂S含量（nmol/mg prot）= x×V样÷（V样×Cpr）= x÷Cpr

（5）按照细胞数量计算

H₂S含量（nmol/10⁴ cell）= x×（V上清+V提取液二）÷ （cells×V上清÷V提取液一）=1.1875×x÷cells

（6）按照液体体积计算

H₂S含量（nmol/mL）= x×（V上清+V提取液二）÷ [V液体×V上清÷（V提取液一+V液体）]=13.0625×x

V上清：提取时上清液的体积：0.8mL；V提取液一：加入提取液一的体积：1mL；V提取液二：加入提取液二的体积：0.15mL；V样本：反应液中加入样本的体积，0.05mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；cells：细胞数量，10⁴个；V液体：液体样本体积：0.1mL。

注意事项：

1、如果ΔA值过低或接近空白值，建议增加样本量后再进行测定；如果ΔA＞1.2，建议稀释样本后再进行测定，计算公式中要乘以相应的稀释倍数。

实验实例：

1、 称取0.1g小鼠肝脏按照样本提取步骤处理，按照测定步骤操作，使用96孔板测定665nm处反应液吸光度，计算ΔA = A测定-A空白=0.150-0.121=0.029，将ΔA代入标准方程y = 0.0020x-0.0633，R² = 0.9951，计算得x；按样本质量计算得：

H₂S含量（nmol/g 质量）= x×（V上清+V提取液二）÷ （W×V上清÷V提取液一）=548.03nmol/g 质量。

2、 称取0.1g紫叶李按照样本提取步骤处理，按照测定步骤操作，使用96孔板测定665nm处反应液吸光度，计算ΔA = A测定-A空白=0.270-0.121=0.149，将ΔA代入标准方程y = 0.0020x-0.0633，R² = 0.9951，计算得x；按样本质量计算得：

H₂S含量（nmol/g 质量）= x×（V上清+V提取液二）÷ （W×V上清÷V提取液一）=1260.53nmol/g 质量。

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