碱性木聚糖酶活性检测试剂盒 糖代谢

碱性木聚糖酶（BAX）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC3615
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 标准品：10mg木糖。临用前加入667μL蒸馏水配制成100μmol/mL的木糖标准液，2-8℃保存8周。

产品说明：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，碱性木聚糖酶（BAX）一般分离自最适生长pH为9-11的微生物。
BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算BAX活力。


注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低温离心机、水浴锅、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、发酵液：发酵液于8000rpm，4℃，离心15min，取上清，置冰上作为待测样本。
2、组织样本：称0.1g组织，加入1mL缓冲液，冰上充分研磨。4℃，8000rpm离心15min，取上清置冰上待测。
3、酶干粉：称1mg，加1mL缓冲液溶解后置冰上待测。
注：含还原糖较高的样本（如植物果实等）可用蒸馏水进行适当稀释后再进行测定。
二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2. 标准溶液的稀释：临用前按下表将标准品稀释为6、5、4、3、2、1μmol/mL的标准溶液待测。

备注：实验中每管需要60μL。

1. 样本测定（在EP管中加入下列试剂）

注意事项：
吸光度变化应该控制在0.01~1.2之间，否则加大样本量或稀释样本，注意同步修改计算公式中的稀释倍数。
实验实例：

1. 取0.1179g橙子加入1mL缓冲液进行匀浆研磨，取上清用蒸馏水稀释10倍后按照测定步骤操作，用96孔板测得ΔA测定=A测定- A对照=1.194-1.040=0.154，带入标曲y=0.2017x-0.1171（R²=0.999），计算x=1.344，按样本质量计算BAX活性得：BAX活力（U/g 质量）= x÷W2÷30×F =1.344÷0.1179÷30×10=3.80 U/g 质量。

2. 取泡菜汁离心取上清按照测定步骤操作，用96孔板测得ΔA测定=A测定- A对照=0.925-0.169=0.756，带入标曲y=0.2017x-0.1171（R²=0.999），计算x=4.329，按发酵液计算BAX活力得：BAX活力（U/mL）= x÷T×F =4.329÷30×1=0.144U/mL。

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