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  • 植物组织果糖含量测试盒 糖代谢
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产品名称:

植物组织果糖含量测试盒 糖代谢

产品品牌: SOLARBIO/索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2024-03-24
储存条件
2-8℃
中文名称
植物组织果糖含量测试盒 糖代谢
有效期
6个月
单位

英文名称
Plant Tissue Fructose Content Assay Kit
检测方法
可见分光光度法 Spectrophotometer
规格
50T/48S

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝CAS详询
分子式详询纯度详询
分子量详询货号BC2450
规格50管/48样供货周期现货
主要用途植物组织果糖含量测定应用领域环保,化工,生物产业,农业,综合

酰基转移酶(AAT)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC2350
规格:10T/9S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件
提取液液体15 mL×1瓶2-8℃保存
试剂一液体10 mL×1瓶2-8℃保存
试剂二粉剂×1-20℃保存
试剂三液体1.5 mL×1支2-8℃保存
试剂四液体1mL×1支2-8℃保存
溶液的配制:
  1. 提取液:内含不溶物,使用前摇匀;

  2. 试剂二:临用前加蒸馏水1mL充分溶解,未用完的试剂2-8℃可以保存2

产品说明:
AAT是一个多功能蛋白大家族,主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应,在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。

AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇,同时还原DTNB生成TNBTNB412nm有吸收峰,测定412nm吸光度增加速率,来计算AAT活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行浴匀浆。4℃,15000 g离心20min,取上清液待测
2、血清(浆)样本:直接检测。(若液体有浑浊则离心后进行测定)
二、测定步骤
  1. 分光光度计预热30min 以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。

  2. 试剂一在37℃水浴保温20min以上。

  3. 样本测定:

 
试剂名称(μL空白管测定管
蒸馏水100-
上清液-100
试剂一(预热)700700
试剂二5050
试剂三100100
试剂四5050
将上述试剂按顺序加入1mL 玻璃比色皿中,加试剂四的同时开始计时,充分吹打混匀,在412nm波长下记录10s时的初始吸光度A1130s后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1空、ΔA=A2-A1测、ΔA=ΔA-ΔA空。空白只需做1-2次。
三、AAT活性计算
1、按样本蛋白浓度计算
单位的定义:37℃中每mL反应体系下每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1个酶活单位。
AAT (U/mg prot) =ΔA÷0.001÷(Cpr×V样) ÷T= 5000×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按样本质量计算
单位的定义:37℃中每mL反应体系下每克组织每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1个酶活单位。
AAT (U/g 质量) =ΔA÷0.001÷(V÷V样总×W) ÷T=5000×ΔA÷W
3、按血清体积计算
单位的定义:37℃中每mL反应体系下每mL血清每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1个酶活单位。
AAT (U/mL 血清) =ΔA÷0.001÷V÷T=5000×ΔA
Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL需要另外测定;V样:加入反应体系中上清液体积,0.1mLW:样本质量,gV样总:提取液体积,1mLT:反应时间,2min
注意事项:
  1. 当吸光值大于1时,建议稀释后测量。

  2. 如果ΔA小于0.01,可以延长反应时间,如测定10s310s的吸光度,计算时相应修改计算公式中反应时间。

实验实例:
  1. 取0.1g肾脏加入1mL提取液进行样本处理,取上清后稀释4倍后按测定步骤操作,测得ΔA=A2-A1=0.105-0.101=0.004ΔA=A2-A1=0.665-0.479=0.186ΔA=ΔA-ΔA=0.186-0.004=0.182,按样本质量计算酶活得:AAT (U/g 质量) =5000×ΔA÷W×4(稀释倍数)=36400 U/g 质量。

  2. 取兔血清直接按照测定步骤操作,测得ΔA=A2-A1=0.105-0.101=0.004ΔA=A2-A10.622-0.521=0.101ΔA=ΔA-ΔA=0.101-0.004=0.097,按血清体积计算酶活得:AAT (U/mL 血清) =5000×ΔA=5000×0.097=485 U/mL 血清。

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