土壤过氧化物酶(S-POD)活性检测试剂盒

土壤过氧化物酶（S-POD）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0895
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

试剂一：临用前加入5.5 mL蒸馏水，用不完的试剂2-8℃保存一周；

试剂四：自备*；

标准品：相当于每1mL*相中含有0.2mg/mL紫色没食子素。

产品说明：

POD主要来源于土壤微生物，能够氧化土壤有机物质产生过氧化物，在腐殖质的形成过程中具有重要作用。S-POD催化有机物质氧化成醌，后者在430nm有特征光吸收。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、0.5mol/L HCl溶液、微量玻璃比色皿/96孔板（非聚苯乙烯材质）、30-50目筛、*（不允许快递）、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。
二、测定步骤

标准品处理：将标准品用0.5 mol/L HCl溶液稀释至0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0.01、0mg/mL，可参考下表。

备注：试验中每个标准管需200µL标准溶液

标曲测定：分光光度计预热30min以上，调节波长至430nm，0mg/mL管调零，直接测定稀释后各标准管的吸光度，记为A标准。

3、样本测定：

三、S-POD活力计算
1、标准曲线的建立
根据标准管的浓度（y，mg/mL）和吸光度A标准（x，A标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（x）带入公式计算测定中样本的浓度y值（mg/mL）。
2、S-POD活力计算
单位的定义：每天每g土样中产生1mg紫色没食子素定义为一个酶活力单位。
S-POD活力（U/g 土样）=y×V提取相÷W÷T=516×y
T：反应时间，1h=1/24d；V提取相：提取相总体积，0.43mL；W：样本质量，0.02g。
参考文献：

Doxey D L. The use of pyrogallol to demonstrate peroxidase in mammalian blood eosinophils[J]. Stain Technology, 1962, 37(6): 367-371.

Nozaki O, Ji X, Kricka L J. New enhancers for the chemiluminescent peroxidase catalysed chemiluminescent oxidation of pyrogallol and purpurogallin[J]. Journal of bioluminescence and chemiluminescence, 1995, 10(3): 151-156.

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