过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒 抗生素

过氧化物酶（POD）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0095
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：液体置于试剂瓶内EP管中，使用前需先离心。

2. 试剂二工作液：取0.01mL试剂二加入3.2 mL试剂一混合备用（约106T），现配现用，也可根据样本量按比例配制。

产品说明：
POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。POD在有过氧化氢存在的情况下，能使愈创木酚发生氧化，生成茶褐色物质，该物质在470nm有最大光吸收。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：

1. 如一次测定的样本数量较多，试剂一、试剂二工作液、试剂三和蒸馏水按照比例混合，在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min，测定时加入240μL即可。

2. 样本测定值如果小于0.005，可将反应时间延长到3-5分钟，计算时除以反应时间即可；如果高于0.8或者反应液中有较多气泡产生，可将样本用提取液进行稀释。计算时乘以相应的稀释倍数即可。

实验实例：
取0.1043g大鼠心脏加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上，用提取液稀释2倍后按照测定步骤操作，用微量玻璃比色皿测定并计算ΔA=A2-A1=0.6257-0.2351=0.3906。按样本质量计算含量得：
POD活性（U/g 质量）=4900×ΔA÷W×2（稀释倍数）=3.67×10⁴ U/g 质量。
取0.1049g黄杨叶片，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上，按照测定步骤操作，用微量玻璃比色皿测定并计算ΔA=A2-A1=0.8512-0.1313=0.7199。按样本质量计算含量得：
POD活性（U/g 质量）=4900×ΔA÷W=3.363×10⁴ U/g 质量
相关发表文献：

1. Yin Y J, Chen C J, Guo S W, et al. The fight against Panax notoginseng root-rot disease using zingiberaceae essential oils as potential weapons[J]. Frontiers in plant science, 2018, 9: 1346.

2. Dou S, Liu S, Xu X, et al. Octanal inhibits spore germination of Penicillium digitatum involving membrane peroxidation[J]. Protoplasma, 2017, 254(4): 1539-1545.

3. Li B, Ding Y, Tang X, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus) [J]. Food and Bioprocess Technology, 2019, 12(4): 563-574.

4. Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019; 162:364-373. (IF3.712)

5. Yanjiao Yin,Chuanjiao Chen,Shiwei Guo,et al. The Fight Against Panax notoginseng Root-Rot Disease Using Zingiberaceae Essential Oils as Potential Weapons. Frontier in Immunology. October 2018;(IF4.716)

参考文献：
[1] Reuveni R. Peroxidase Activity as a Biochemical Marker for Resistance of Muskmelon (Cucumis melo) to Pseudoperonospora cubensis[J]. Phytopathology, 1992, 82(7).
[2] Doerge D R, Divi R L, Churchwell M I. Identification of the Colored Guaiacol Oxidation Product Produced by Peroxidases[J]. Analytical Biochemistry, 1997, 250(1):10-17.
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