品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | CAS | 详询 |
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分子式 | 详询 | 纯度 | 详询 |
分子量 | 详询 | 货号 | BC1280 |
规格 | 50T/24S | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 二胺氧化酶(DAO)活性检测 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农业,综合 |
二胺氧化酶(DAO)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC1280
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体3 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体140 μL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1. 标准品:临用前取102 μL加入898μL蒸馏水得到1mol/L(即1000μmol/mL)的过氧化*溶液,2-8℃保存4周。
2. 0.25μmol/mL标准溶液的配制:取10μL 1000μmol/mL 标准液和990μL蒸馏水混合配成10μmol/mL 标准液;再取25μL 10μmol/mL 标准液和975μL蒸馏水混合配成0.25μmol/mL标准溶液备用。
产品说明:
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠黏膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白质合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损程度。
DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢,H2O2氧化亚铁*中的Fe2+生成Fe3+,Fe3+进一步与4-氨基安替 林和酚反应生成红色醌类化合物,在505nm处有特征吸收峰,通过测定505nm处的吸光值来计算DAO的活性
.
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料"附件
实验实例:
称取0.1009g竹叶样本,加入1mL提取液进行冰浴匀浆,10000g 4℃离心20min,取上清置冰上待测,之后按照测定步骤,用1mL玻璃比色皿测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=1.553-0.638=0.915,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.353-0.059=0.294;按样本质量计算酶活得:DAO活性(U/g 质量) = 0.25×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F =7.711 U/g 质量
称取0.1000g十二指肠样本,加入1mL提取液进行冰浴匀浆,10000g 4℃离心20min,取上清置冰上待测,之后按照测定步骤,用1mL玻璃比色皿测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.363-0.251=0.112,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.353-0.059=0.294;按样本质量计算酶活得:DAO活性(U/g 质量) = 0.25×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F =0.952 U/g 质量
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