游离脂肪酸（FFA）含量检测试剂盒

游离脂肪酸（FFA）含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0595
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 
   

1. 试剂一：实验前，取一个玻璃瓶，按照正 庚烷：无水甲醇：氯仿=24:1:25的比例配制（自备），盖紧后混匀，大概需要50mL，2-8℃保存。使用后及时封口；

2. 试剂二：将试剂二*倒入试剂二A中40℃加热震荡溶解20min，此溶液为饱和溶液，若还有粉剂未溶解，取上清使用即可，2-8℃可以保存3个月；

3. 试剂三：临用前取1瓶加入13 mL无水乙醇充分溶解，未用完的试剂2-8℃可以保存2周；

4. 标准品：临用前把试剂转移到10 mL玻璃瓶中，加入7.8 mL氯仿充分溶解，即为5μmol/mL的棕榈酸标准溶液，未用完的试剂2-8℃可以保存4周。

产品说明：
FFA既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。血清中FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关。
FFA与铜离子结合形成脂肪酸铜盐，并溶于氯仿；利用铜试剂法测定铜离子含量，即可推算出游离脂肪酸含量。

技术指标：
检出限：0.0390 μmol/mL
线性范围：0.05-2 μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
  可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液枪、漩涡混匀器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、一个50mL玻璃瓶、一个10mL玻璃瓶、正 庚烷、无水甲醇、氯仿（*）、冰、无水乙醇和蒸馏水。

操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件

注意事项：
1. 试剂三配制应尽量晚配，可在操作到加入试剂二时，再配制试剂三。
2. 必须保证每管的震荡频率及时间一致。
3. 尽量在30min内完成测量。
4. 上层溶液不可以直接加入到96孔板内，并且测完后要密封好再丢弃。
5. 因所用试剂多数为有机溶剂，同一支吸头多次吸取会造成体积不准确，建议更换吸头。
实验实例：

1. 取小鼠血清进行样本处理，按照测定步骤操作，使用96孔板测得A对照管=0.098、A测定管=0.308、ΔA测定=A测定管-A对照管=0.308-0.098=0.21，带入标准曲线y =0.6679x+0.019，计算x=0.286，按血清含量计算：

FFA含量（μmol/L）=1000x=1000×0.286=286 μmol/L。
相关发表文献：

1. Shanming Ruan,Zhiqian Zhang, Xinxin Tian,et al. Compound Fuling Granule Suppresses Ovarian Cancer Development and Progression by disrupting mitochondrial function, galactose and fatty acid metabolism. Journal of Cancer. September 2018;(IF3.182)

2. Tunyu Jian,Yuexian Wu,Xiaoqin Ding,et al. A novel sesquiterpene glycoside from Loquat leaf alleviates oleic acid-induced steatosis and oxidative stress in HepG2 cells. Biomedicine & Pharmacotherapy. January 2018;(IF3.743)

3. Rui Wang,Junhua Yuan,Caishun Zhang,et al. Neuropeptide Y-Positive Neurons in the Dorsomedial Hypothalamus Are Involved in the Anorexic Effect of Angptl9. Frontiers in Immunology. December 2018;(IF3.72)

4. Yao L, Chen S, Li W. Fatostatin inhibits the development of endometrial carcinoma in endometrial carcinoma cells and a xenograft model by targeting lipid metabolism[J]. Archives of Biochemistry and Biophysics, 2020: 108327.

参考文献：

1. Laurell S, Tibbling G. Colorimetric micro-determination of free fatty acids in plasma[J]. Clinica chimica acta, 1967, 16(1): 57-62.

2. Itaya K. A more sensitive and stable colorimetric determination of free fatty acids in blood[J]. Journal of lipid Research, 1977, 18(5): 663-665.

3. Duncombe W G. The colorimetric micro-determination of non-esterified fatty acids in plasma[J]. Clinica chimica acta, 1964, 9: 122-125.

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