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  • ATP含量检测试剂盒 微量法
产品名称:

ATP含量检测试剂盒 微量法

产品品牌: 索莱宝 价格: 1560
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-05
ATP含量检测试剂盒 微量法
测定意义:ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0305
规格100管/96样供货周期现货
主要用途ATP含量检测试剂应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

ATP含量检测试剂盒 微量法

ATP 含量检测试剂盒说明书
微量法

产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼
英文名称:ATP content detection kit
产品商标:solarbio

注意:正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC0305
规格:100T/96S
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            
参考价格:1560
库存状态:现货
关键词:ATP含量检测|ATP含量|ATP|

产品内容:
提取液:液体100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入3.5mL 蒸馏水充分溶解,可加热促进溶解;
试剂三:液体4mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前每支加入0.4mL 蒸馏水溶解,可分装后-20℃保存,避免反复冻融;
试剂五:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入1mL 蒸馏水;
试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入0.5mL 蒸馏水备用,可分装后-20℃保存,避免反复冻融;
标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。5mg ATP,临用前加入0.826mL 蒸馏水配成10μmol/mL 的ATP标准溶液。

产品说明:
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP 含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。
HK 催化葡萄糖和ATP 合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH,NADPH 在340nm 有特征吸收峰,NADPH 和ATP 含量成正比,以此反应ATP 含量。

自备仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/ 96 孔UV 板、研钵/匀浆器、蒸馏水和lv仿。

操作步骤:
一、ATP 的提取:
1、血清(浆)中ATP 的提取:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议取约0.1mL 血清(浆),加入1mL 提取液),充分震荡,10000g,4℃离心10min;取上清液另一EP 管中,加入500μL 的lv仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心3min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。

2、组织中ATP 的提取:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10min,取上清另一EP 管中,加入500μL 的lv仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心3min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
3、细胞或细菌中ATP 的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液),超声波破碎1min(冰浴,强度20%或200W,超声2s,停1s),10000g 4 ℃离心10min;取上清液另一EP 管中,加入500μL 的lv仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心3min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。

二、测定步骤:
1、紫外分光光度计/酶标仪预热30 min 以上,调节波长到340nm,蒸馏水调零。
2、将10μmol/mL 的ATP 标准溶液用蒸馏水稀释16 倍即0.625 μmol/mL 标准溶液备用。
3、工作液的配制:临用前请按试剂二(mL):试剂三(mL):试剂四(mL):试剂五(mL):试剂六(mL)=1:1:0.1:0.4:0.1 的比例配制,现配现用。
4、加样表
在微量石英比色皿或96 孔UV 板中加入:
试剂名称(μL)          测定管          标准管
样本                   20
标准液                                 20
试剂一                128             128
工作液                 52              52

充分混合后,立即测定340nm 下10s 的吸光值A1,然后将比色皿连同反应液一起放入37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)水浴中反应3min,拿出擦拭干净立即测定其在3min10s 时的吸光值A2。用96 孔板则放入37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)培养箱中(酶标仪若自带控温功能,则将温度调37℃或25℃)。分别计算ΔA 测定=A2 测定管-A1 测定管,ΔA 标准=A2标准管-A1 标准管

三、ATP 含量计算:
1、血清(浆)中ATP 含量计算
ATP 含量(μmol/mL) =ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准)×(V 提取+V 血清(浆))÷V 血清(浆)=6.875×ΔA 测定÷ΔA 标准
2、组织、细菌或细胞中ATP 含量计算
1) 按样本鲜重计算
ATP 含量(μmol/g 鲜重)= ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 提取÷W=0.625×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W
2) 按细菌或细胞密度计算
ATP 含量(μmol/106 cell)=ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 提取÷5=0.125×ΔA 测定÷ΔA 标准

C 标准管:标准液浓度,0.625μmol/mL;
V 提取:加入的提取液体积,1mL;
V 血清(血浆):血清(浆)体积,0.1mL;
W:样本质量,g;
5:细胞或细菌总数,5×106 个。

注意事项
1、加入提取液离心后的上清若为浑浊为正常现象。
2、提取过程严格在冰浴条件下进行。
3、用微量石英比色皿测量的吸光值大于1.4 或者ΔA 测定大于1.2 时(石英96 孔板的吸光值大于1.4 或者ΔA 测定大于1.2 时),可以将样品稀释后进行测定。若吸光值小于0.01,则可以增加反应时间(5min 或10min)来测定,标准品需要增加同样的反应时间。

相关文献:

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death & Disease 影响因子:5.959 PMID:30850587
《RIP3 inhibition protects locomotion function through ameliorating mitochondrial antioxidative capacity after spinal cord injury》 作者:Yang Wang,Jianhang Jiao,Shanyong Zhang,Changjun Zheng,Minfei Wu 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影响因子:3.743 PMID:31146112
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影响因子: PMID:30453281
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影响因子:5.657 PMID:31022448
 

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