ATP含量检测试剂盒 微量法

ATP含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0305
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 提取液：低温条件下，可能有结晶析出，放于60℃水浴加热溶解即可，不影响使用。

2. 试剂二：临用前加入3.5 mL蒸馏水充分溶解，可加热促进溶解，2-8℃可保存4周；

3. 试剂四：临用前取1支加入0.2 mL蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融；

4. 试剂五：临用前加入1 mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；

5. 试剂六：临用前取1支加入0.25 mL蒸馏水备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；

6. 标准品：5 mg ATP。临用前加入0.826 mL蒸馏水配成10 μmol/mL的ATP标准溶液，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；

7. 工作液的配制：临用前请按试剂二(mL)：试剂三(mL)：试剂四(mL)：试剂五(mL)：试剂六(mL)=0.2：0.2：0.02：0.08：0.02的比例配制（0.52mL，约10T的量），现配现用。

产品说明：
ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。

HK催化葡萄糖和ATP合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，NADPH和ATP含量成正比，以此反应ATP含量。


技术指标：
低检出限：0.0026 μmol/mL
线性范围：0.01953-3 μmol/mL

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、低温离心机、可调式移液枪、微量石英比色皿/ 96孔UV板、研钵/匀浆器、蒸馏水、冰和氯仿。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：

1. 加入提取液离心后的上清若为浑浊为正常现象。

2. 如果吸光值大于1.5，建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。注意计算公式中乘以稀释倍数；如果吸光值过低或接近空白，建议加大样本量后进行测定，注意同步修改计算公式。

实验实例：

1. 取0.1g兔肺脏加入1mL提取液进行冰浴匀浆，10000g 4℃离心10min，取上清至另一EP管中，加入500μL的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心3min，取上清，置冰上按照测定步骤操作，使用微量石英比色皿测得计算ΔA测定=A2测定-A1测定=0.0873-0.065=0.0223，ΔA标准=A2标准-A1标准=0.4368-0.1435=0.2933，按样本质量计算含量得：

ATP含量（μmol/g 质量）=0.625×ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.625×0.0223÷0.2933÷0.1=0.475 μmol/g 质量。

1. 取0.1g稗草加入1mL提取液进行冰浴匀浆，10000g 4℃离心10min，取上清至另一EP管中，加入500μL的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心3min，取上清，置冰上按照测定步骤操作，使用微量石英比色皿测得计算ΔA测定=A2测定-A1测定=0.5351-0.4969=0.0382，ΔA标准=A2标准-A1标准=0.4368-0.1435=0.2933，按样本质量计算含量得：

ATP含量（μmol/g 质量）=0.625×ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.625×0.0382÷0.2933÷0.1=0.814 μmol/g 质量。

1. 取血清0.1mL 加入1mL 提取液，充分震荡，10000g，4℃离心10min；取上清液至另一EP管中，加入500μL的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心3min，取上清置冰上，使用微量石英比色皿测得计算，ΔA测定=A2测定-A1测定=0.0569-0.0449=0.012，ΔA标准=A2标准-A1标准=0.4368-0.1435=0.2933，按液体体积计算含量得：

ATP含量(μmol/mL) =6.875×ΔA测定÷ΔA标准=6.875×0.012÷0.2933=0.281 μmol/mL。
相关发表文献：

1. Meixi Peng,Dan Yang,Yixuan Hou,et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis. Cell Death and Disease. March 2019;(IF5.959)

2. Yang Wang,Jianhang Jiao,Shanyong Zhang,et al. RIP3 inhibition protects locomotion function through ameliorating mitochondrial antioxidative capacity after spinal cord injury. Biomedicine & Pharmacotherapy. August 2019;116.(IF3.743)

3. Luo M,Luo Y, Mao N,et al. Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell

Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication. Cellular Physiology
and Biochemistry. November 2018;
参考文献：

1. Lin X, Wu Y, Chen X, et al. Determination of adenosine phosphate in tobacco leaf by UPLC with phenol-TEA pretreatment [J]. Acta Tabacaria Sinica, 2014, 20(1): 26-31.

2. Beutler E, Mathai C K. A comparison of normal red cell ATP levels as measured by the firefly system and the hexokinase system[J]. Blood, 1967, 30(3): 311-320.

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