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  • ATP含量检测试剂盒 微量法
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产品名称:

ATP含量检测试剂盒 微量法

产品品牌: SOLARBIO/索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2024-08-01
储存条件
-20℃
中文名称
ATP含量检测试剂盒 微量法
有效期
6个月
单位

推荐
若使用96孔板测定,需使用96孔UV板,推荐货号YA0602
英文名称
ATP Content Assay Kit
检测方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
规格
100T/96S
自备试剂
该试剂盒实验过程中需自备试剂,详情见网站说明书

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝CAS详询
分子式详询纯度详询
分子量详询货号BC0305
规格100管/96样供货周期现货
主要用途ATP含量检测试剂应用领域环保,化工,生物产业,农业,综合


ATP含量检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号BC0305
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件
提取液液体110 mL×1瓶2-8℃保存
试剂一液体20 mL×1瓶2-8℃保存
试剂二粉剂×12-8℃保存
试剂三液体4 mL×1瓶2-8℃保存
试剂四粉剂×2-20保存
试剂五粉剂×12-8℃保存
试剂六粉剂×2-20保存
标准品粉剂×1-20保存

溶液的配制:

  1. 提取液低温条件下,可能有结晶析出,放于60℃水浴加热溶解即可,不影响使用。

  2. 试剂二:临用前加入3.5 mL蒸馏水充分溶解,可加热促进溶解,2-8℃可保存4周;

  3. 试剂四:临用前1加入0.2 mL蒸馏水溶解,用不完的试剂-20℃分装保存2周,避免反复冻融;

  4. 试剂五:临用前加入1 mL蒸馏水充分溶解,用不完的试剂-20℃分装保存4周,避免反复冻融;

  5. 试剂六:临用前1加入0.25 mL蒸馏水备用,用不完的试剂-20℃分装保存4周,避免反复冻融;

  6. 标准品:5 mg ATP临用前加入0.826 mL蒸馏水配成10 μmol/mLATP标准溶液用不完的试剂-20℃分装保存4周,避免反复冻融

  7. 工作液的配制:临用前请按试剂二(mL):试剂三(mL):试剂四(mL):试剂五(mL):试剂六(mL)=0.20.2:0.020.080.02的比例配制0.52mL,约10T的量),现配现用。

产品说明:
ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP 含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。

HK催化葡萄糖和ATP合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPHNADPH340nm有特征吸收峰,NADPHATP含量成正比,以此反应ATP含量。


技术指标:
低检出限:0.0026 μmol/mL
线性范围:0.01953-3 μmol/mL

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
自备的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱低温离心机、可调式移液枪、微量石英比色皿/ 96孔UV板、研钵/匀浆器、蒸馏水、冰和氯仿。
操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项

  1. 加入提取液离心后的上清若为浑浊为正常现象。

  2. 如果吸光值大于1.5,建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定注意计算公式中乘以稀释倍数;如果吸光值过低或接近空白,建议加大样本量后进行测定,注意同步修改计算公式。

实验实例:

  1. 取0.1g兔肺脏加入1mL提取液进行冰浴匀浆,10000g 4℃离心10min,取上清至另一EP管中,加入500μL的氯仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心3min,取上清,置冰上按照测定步骤操作,使用微量石英比色皿测得计算ΔA测定=A2测定-A1测定=0.0873-0.065=0.0223ΔA标准=A2标准-A1标准=0.4368-0.1435=0.2933按样本质量计算含量

ATP含量(μmol/g 质量)=0.625×ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.625×0.0223÷0.2933÷0.1=0.475 μmol/g 质量。

  1. 0.1g稗草加入1mL提取液进行冰浴匀浆,10000g 4℃离心10min,取上清至另一EP管中,加入500μL的氯仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心3min,取上清,置冰上按照测定步骤操作,使用微量石英比色皿测得计算ΔA测定=A2测定-A1测定=0.5351-0.4969=0.0382ΔA标准=A2标准-A1标准=0.4368-0.1435=0.2933按样本质量计算含量

ATP含量(μmol/g 质量)=0.625×ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.625×0.0382÷0.2933÷0.1=0.814 μmol/g 质量。

  1. 取血清0.1mL 加入1mL 提取液,充分震荡,10000g4℃离心10min;取上清液至另一EP管中,加入500μL的氯仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心3min,取上清置冰上使用微量石英比色皿测得计算ΔA测定=A2测定-A1测定=0.0569-0.0449=0.012ΔA标准=A2标准-A1标准=0.4368-0.1435=0.2933,按液体体积计算含量得:

ATP含量(μmol/mL) =6.875×ΔA测定÷ΔA标准=6.875×0.012÷0.2933=0.281 μmol/mL
相关发表文献:

  1. Meixi Peng,Dan Yang,Yixuan Hou,et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis. Cell Death and Disease. March 2019;(IF5.959)

  2. Yang Wang,Jianhang Jiao,Shanyong Zhang,et al. RIP3 inhibition protects locomotion function through ameliorating mitochondrial antioxidative capacity after spinal cord injury. Biomedicine & Pharmacotherapy. August 2019;116.(IF3.743)

  3. Luo M,Luo Y, Mao N,et al. Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell


Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication. Cellular Physiology
and Biochemistry. November 2018;
参考文献:

  1. Lin X, Wu Y, Chen X, et al. Determination of adenosine phosphate in tobacco leaf by UPLC with phenol-TEA pretreatment [J]. Acta Tabacaria Sinica, 2014, 20(1): 26-31.

  2. Beutler E, Mathai C K. A comparison of normal red cell ATP levels as measured by the firefly system and the hexokinase system[J]. Blood, 1967, 30(3): 311-320.

相关系列产品:
BC0060/BC0065   Na+k+-ATP酶活性检测试剂盒
BC0960/BC0965   Ca++Mg++-ATP酶活性检测试剂盒
 

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