品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | CAS | 详询 |
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分子式 | 详询 | 纯度 | 详询 |
分子量 | 详询 | 货号 | BC0175 |
规格 | 100管/48样 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 超氧化物歧化酶(SOD)活性检测 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农业,综合 |
超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC0175
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体100 μL×1支 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 液体0.25mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
试剂二:使用前先使用掌上离心机离心至管底再吹打混匀;
试剂二工作液:根据样本数量按试剂二:蒸馏水=30μL:270μL(共300μL,约15S)的比例配制试剂二工作液,现用现配;
试剂四工作液:根据样本量按试剂四:蒸馏水=60μL:240μL(共300μL,约30T)的比例配制试剂四工作液,现用现配。
产品说明:
SOD(EC 1.15.1.1)是一种广泛存在于生物体内的金属酶,是重要的氧自由基清除剂,能催化超氧化物阴离子发生歧化作用,生成H2O2和O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。
通过黄*呤及黄*呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-),O2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜,后者在560nm处有吸收;SOD可清除O2-,从而抑制了甲臜的形成;反应液蓝色越深,说明SOD活性愈低,反之活性越高。血清或者SOD酶活小的样本更适合使用BC5165超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(WST-1法)进行测定。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项:
样本和试剂二工作液使用时在冰上放置。
样本较多时,可按表格配制测定管工作液和对照管工作液(包含试剂一、(试剂二工作液)、试剂三、蒸馏水),试剂四工作液必须最后加入。
反应完成后,可能有沉淀生成,混匀后测定即可。
实验实例:
取0.1g大鼠肾脏加入1mL提取液进行匀浆研磨,取上清之后按照测定步骤操作,用96孔板测得计算ΔA测定= A测定-A对照=0.566-0.138=0.428,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.802-0.041=0.761,抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白×100%=43.8%,按样本质量计算酶活得:
SOD活性(U/g 质量)=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W=77.94 U/g 质量。
取0.1g稗草叶片加入1mL提取液进行匀浆研磨,取上清用蒸馏水稀释4倍后按照测定步骤操作,用96孔板测得计算ΔA测定= A测定-A对照=0.498-0.078=0.42,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.771-0.042=0.729,抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白×100%=42.4%,按样本质量计算酶活得:
SOD活性(U/g 质量)=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×4(稀释倍数)=294.4U/g 质量。
取20μL羊血清蒸馏水稀释50倍后直接按照测定步骤操作,用96孔板测得计算ΔA测定= A测定-A对照=0.467-0.049=0.418,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.771-0.042=0.729,抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白×100%=42.7%,按血清/血浆体积计算酶活得:
血清(浆)SOD活性(U/mL)=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ×50(稀释倍数)=372.6 U/mL。
取1000万细胞加入1mL提取液,超声破碎,离心取上清,直接按照测定步骤操作,用96孔板测得计算ΔA测定= A测定-A对照=0.52-0.058=0.462,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.802-0.04=0.762,抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白×100%=39.4%,按细胞/细菌数量计算酶活得:
SOD 活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总] ÷(1000×V样÷V样总)=0.0065 U/104 cell。
相关发表文献:
Beibei Li,Yang Ding,Xiuli Tang, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus). Food and Bioprocess Technology. April 2019;12: 563-574. (IF3.032)
Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng, et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019; 162: 364-373. (IF3.712)
Yang Yang,Li Jing,Wei Cong, et al. Amelioration of nonalcoholic fatty liver disease by swertiamarin in fructose-fed mice. Phytomedicine. June 2019;59. (IF4.18)
Siyang Yu,Bo Dong,Zhenfei Fang,et al.Knockdown of lncRNA AK139328 alleviates myocardial ischaemia/reperfusion injury in diabetic mice via modulating miR-204-3p and inhibiting autophagy. Journal of Cellular and Molecular Medicine. July 2018;(IF4.658)
Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, et al. Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development. Toxicological & Environmental Chemistry. February 2019;(IF3.547)
参考文献:
Spitz D R, Oberley L W. An assay for superoxide dismutase activity in mammalian tissue homogenates[J]. Analytical Biochemistry, 1989, 179(1):8-18.
Masayasu M, Hiroshi Y. A simplified assay method of superoxide dismutase activity for clinical use[J]. Clinica Chimica Acta, 1979, 92(3):337-342.
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