超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒 抗氧

超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒 抗氧

超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书 详见附件
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0170
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：使用前先使用掌上离心机离心至管底再吹打混匀；

2. 试剂二工作液：根据样本数量按试剂二：蒸馏水=30μL：270μL（共300μL，约5S）的比例配制试剂二工作液，现用现配；

3. 试剂四工作液：根据样本量按试剂四：蒸馏水=60μL：240μL（共300μL，约10T）的比例配制试剂四工作液，现用现配。

SOD（EC 1.15.1.1）是一种广泛存在于生物体内的金属酶，是重要的氧自由基清除剂，能催化超氧化物阴离子发生歧化作用，生成H₂O₂和O₂。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H₂O₂主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。
通过*及*氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O₂^-)，O₂^-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm处有吸收；SOD可清除O₂^-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。血清或者SOD酶活小的样本更适合使用BC5160超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒（WST-1法）进行测定。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3. 血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至560nm，蒸馏水调零。

2. 临用前根据样本数量取部分试剂一、试剂三和试剂四工作液37℃水浴5min以上。

3. 样本测定（在EP管中加入下列试剂）

充分混匀，37℃水浴30min后，置于1mL玻璃比色皿测定560nm下的吸光度，分别记为A测定、A对照、A1空白、A2空白，计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA空白=A1空白-A2空白。如底部有沉淀，混匀后再行测定。（空白管1和空白管2各只需做1~2管，每个样本有一个对照管）

• SOD活性计算

1、抑制百分率的计算：抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白× 100%
尽量使样本的抑制百分率在30-70%范围内，越靠近50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样本；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本或者提高操作表中样本体积，同时减少相同的蒸馏水体积。
2、SOD酶活性单位：在上述*氧化酶偶联反应体系中抑制百分率为50%时，反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位。
3、SOD酶活性计算：
（1）血清（浆）SOD活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷V样×F
=11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F
（2）组织、细菌或培养细胞SOD活力计算：

1. 按样本蛋白浓度计算

SOD活性 (U/mg prot)=[抑制百分率÷（1-抑制百分率）×V反总]÷（V样×Cpr）×F
=11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷Cpr×F

1. 按样本质量计算

SOD活性 (U/g 质量)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V反总]÷(W×V样÷V样总)×F
=11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F

1. 按细菌或细胞数量计算

SOD活力 (U/10⁴ cell)= [抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷(N×V样÷V样总)×F
=11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F÷N
V反总：反应体系总体积，1 mL；V样：加入反应体系中样本的体积，0.09mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：细胞或细菌总数，以万计；F：样本稀释倍数。
注意事项：

1. 样本和试剂二工作液使用时在冰上放置。

2. 样本较多时，可按表格配制测定管工作液和对照管工作液（包含试剂一、（试剂二工作液）、试剂三、蒸馏水），试剂四工作液必须最后加入。

3. 反应完成后，可能有沉淀生成，混匀后测定即可。

实验实例：

1. 取0.1g绿萝叶片加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定-A对照=0.532-0.085=0.447，ΔA空白=A1空白-A2空白=0.853-0.002=0.851，抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白×100%=47.5%，按样本质量计算酶活得：

SOD活性 (U/g 质量)= 11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W=100.5U/g 质量。

1. 取0.1g小鼠肾脏加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定= A测定-A对照=0.608-0.109=0.499，ΔA空白=A1空白-A2空白=0.853-0.002=0.851，抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白× 100% =41.4%，按样本质量计算酶活得：

SOD活性 (U/g 质量)= 11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W=78.5U/g 质量。

1. 取1000万细胞，加入1mL提取液提取离心，之后再按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定-A对照=0.614-0.015=0.599，ΔA空白=A1空白-A2空白=0.853-0.002=0.851，抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白× 100% =29.6%，按细菌或细胞数量计算酶活得：

SOD活性 (U/10⁴ cell)=抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总 ÷(1000×V样÷V样总)=0.0046U/10⁴ cell。
相关发表文献：

1. Beibei Li,Yang Ding, Xiuli Tang, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus). Food and Bioprocess Technology. April 2019; 12:563-574.(IF3.032)

2. Yanan Wang,Cheng zhen Liang,Zhigang Meng, et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019; 162: 364-373. (IF3.712)

3. Yang Yang,Li Jing,Wei Cong, et al. Amelioration of nonalcoholic fatty liver disease by swertiamarin in fructose-fed mice. Phytomedicine. June 2019;59. (IF4.18)

4. Siyang Yu,Bo Dong, Zhenfei Fang, et al. Knockdown of lncRNA AK139328 alleviates myocardial ischaemia/reperfusion injury in diabetic mice via modulating miR-204-3p and inhibiting autophagy. Journal of Cellular and Molecular Medicine. July 2018;(IF4.658)

5. Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, et al. Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development. Toxicological & Environmental Chemistry. February 2019;(IF3.547)

参考文献：

1. Spitz D R, Oberley L W. An assay for superoxide dismutase activity in mammalian tissue homogenates[J]. Analytical Biochemistry, 1989, 179(1):8-18.

2. Masayasu M, Hiroshi Y. A simplified assay method of superoxide dismutase activity for clinical use[J]. Clinica Chimica Acta, 1979, 92(3):337-342.

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