品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | CAS | 详询 |
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分子式 | 详询 | 纯度 | 详询 |
分子量 | 详询 | 货号 | BC0170 |
规格 | 50管/24样 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | SOD(EC 1.15.1.1)是一种广泛存在于生物体内的金属酶,是重要的氧自由 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农业,综合 |
超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒 抗氧
超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒说明书 详见附件
可见分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC0170
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体160 μL×1支 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体11 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 液体0.5mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
试剂二:使用前先使用掌上离心机离心至管底再吹打混匀;
试剂二工作液:根据样本数量按试剂二:蒸馏水=30μL:270μL(共300μL,约5S)的比例配制试剂二工作液,现用现配;
试剂四工作液:根据样本量按试剂四:蒸馏水=60μL:240μL(共300μL,约10T)的比例配制试剂四工作液,现用现配。
SOD(EC 1.15.1.1)是一种广泛存在于生物体内的金属酶,是重要的氧自由基清除剂,能催化超氧化物阴离子发生歧化作用,生成H2O2和O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。
通过*及*氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-),O2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜,后者在560nm处有吸收;SOD可清除O2-,从而抑制了甲臜的形成;反应液蓝色越深,说明SOD活性愈低,反之活性越高。血清或者SOD酶活小的样本更适合使用BC5160超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(WST-1法)进行测定。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
细菌或细胞样本:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500-1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率200W,超声3s,间隔10s,重复30次),8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5-10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
血清(浆)样本:直接检测。
二、测定步骤
分光光度计预热30min以上,调节波长至560nm,蒸馏水调零。
临用前根据样本数量取部分试剂一、试剂三和试剂四工作液37℃水浴5min以上。
样本测定(在EP管中加入下列试剂)
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 空白管1 | 空白管2 |
样 本 | 90 | 90 | - | - |
试剂一 | 240 | 240 | 240 | 240 |
试剂二工作液 | 60 | - | 60 | - |
试剂三 | 180 | 180 | 180 | 180 |
蒸馏水 | 400 | 460 | 490 | 550 |
试剂四工作液 | 30 | 30 | 30 | 30 |
充分混匀,37℃水浴30min后,置于1mL玻璃比色皿测定560nm下的吸光度,分别记为A测定、A对照、A1空白、A2空白,计算ΔA测定=A测定-A对照,ΔA空白=A1空白-A2空白。如底部有沉淀,混匀后再行测定。(空白管1和空白管2各只需做1~2管,每个样本有一个对照管)
SOD活性计算
1、抑制百分率的计算:抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白× 100%
尽量使样本的抑制百分率在30-70%范围内,越靠近50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于70%,则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高,则需适当稀释样本;如果测定出来的抑制百分率偏低,则需重新准备浓度比较高的待测样本或者提高操作表中样本体积,同时减少相同的蒸馏水体积。
2、SOD酶活性单位:在上述*氧化酶偶联反应体系中抑制百分率为50%时,反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位。
3、SOD酶活性计算:
(1)血清(浆)SOD活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷V样×F
=11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F
(2)组织、细菌或培养细胞SOD活力计算:
按样本蛋白浓度计算
SOD活性 (U/mg prot)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷(V样×Cpr)×F
=11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷Cpr×F
按样本质量计算
SOD活性 (U/g 质量)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V反总]÷(W×V样÷V样总)×F
=11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F
按细菌或细胞数量计算
SOD活力 (U/104 cell)= [抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷(N×V样÷V样总)×F
=11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F÷N
V反总:反应体系总体积,1 mL;V样:加入反应体系中样本的体积,0.09mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;N:细胞或细菌总数,以万计;F:样本稀释倍数。
注意事项:
样本和试剂二工作液使用时在冰上放置。
样本较多时,可按表格配制测定管工作液和对照管工作液(包含试剂一、(试剂二工作液)、试剂三、蒸馏水),试剂四工作液必须最后加入。
反应完成后,可能有沉淀生成,混匀后测定即可。
实验实例:
取0.1g绿萝叶片加入1mL提取液进行匀浆研磨,取上清之后按照测定步骤操作,测得计算ΔA测定=A测定-A对照=0.532-0.085=0.447,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.853-0.002=0.851,抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白×100%=47.5%,按样本质量计算酶活得:
SOD活性 (U/g 质量)= 11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W=100.5U/g 质量。
取0.1g小鼠肾脏加入1mL提取液进行匀浆研磨,取上清之后按照测定步骤操作,测得计算ΔA测定= A测定-A对照=0.608-0.109=0.499,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.853-0.002=0.851,抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白× 100% =41.4%,按样本质量计算酶活得:
SOD活性 (U/g 质量)= 11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W=78.5U/g 质量。
取1000万细胞,加入1mL提取液提取离心,之后再按照测定步骤操作,测得计算ΔA测定=A测定-A对照=0.614-0.015=0.599,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.853-0.002=0.851,抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白× 100% =29.6%,按细菌或细胞数量计算酶活得:
SOD活性 (U/104 cell)=抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总 ÷(1000×V样÷V样总)=0.0046U/104 cell。
相关发表文献:
Beibei Li,Yang Ding, Xiuli Tang, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus). Food and Bioprocess Technology. April 2019; 12:563-574.(IF3.032)
Yanan Wang,Cheng zhen Liang,Zhigang Meng, et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019; 162: 364-373. (IF3.712)
Yang Yang,Li Jing,Wei Cong, et al. Amelioration of nonalcoholic fatty liver disease by swertiamarin in fructose-fed mice. Phytomedicine. June 2019;59. (IF4.18)
Siyang Yu,Bo Dong, Zhenfei Fang, et al. Knockdown of lncRNA AK139328 alleviates myocardial ischaemia/reperfusion injury in diabetic mice via modulating miR-204-3p and inhibiting autophagy. Journal of Cellular and Molecular Medicine. July 2018;(IF4.658)
Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, et al. Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development. Toxicological & Environmental Chemistry. February 2019;(IF3.547)
参考文献:
Spitz D R, Oberley L W. An assay for superoxide dismutase activity in mammalian tissue homogenates[J]. Analytical Biochemistry, 1989, 179(1):8-18.
Masayasu M, Hiroshi Y. A simplified assay method of superoxide dismutase activity for clinical use[J]. Clinica Chimica Acta, 1979, 92(3):337-342.
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